세포 동결 배지 및 염분 기반 솔루션

세포는 냉동 중에 수분을 잃게 되며, 최소 부피 이하로 줄어들면 크기가 줄어들고 빠르게 생존력을 잃게 됩니다. 디메틸설폭사이드(DMSO)와 같은 동결 보호제를 추가하면 이러한 영향을 완화할 수 있습니다.

배지에는 느린 동결 과정에서 얼음 결정이 형성되는 것을 방지하고 세포 생존력을 유지하기 위해 물을 흡수할 수 있는 약제가 포함되어야 합니다.

혈청은 냉동 보존에 필요하지 않은 성분이 포함된 블랙박스로, 냉동 및 해동 과정에서 세포에 해를 끼칠 수도 있습니다. 동물성 성분이 없는 솔루션은 재현성과 일관성뿐만 아니라 생존력과 회복력을 향상시키는 데 도움이 됩니다.

DMSO는 세포에 세포독성이 있습니다. 냉동 보존 중에는 세포가 10% 이하로 희석된 용액에만 머물 수 있습니다.

동일한 효과가 있는 무독성 보호제만 있다면 DMSO 없이도 세포를 동결할 수 있습니다.

대부분의 세포 배양은 영하 130°C 이하의 온도에서 무기한은 아니더라도 수년 동안 보관할 수 있습니다. ATCC는 40년 이상 냉동 보존된 배양액에서 세포를 회수해 왔습니다. 냉동 보존의 장점은 장비와 시약에 필요한 투자보다 훨씬 더 큽니다. 이러한 장점은 다음과 같습니다.

• 장비 고장이나 미생물 또는 기타 세포주에 의한 오염으로 인한 배양액 손실을 방지하기 위해 안전 재고를 생성할 수 있습니다.
• 사용하지 않는 배양을 유지하는 데 필요한 시간, 에너지, 재료를 절약할 수 있습니다.
• 궁극적으로 노화될 세포의 개체 수가 두 배로 줄어드는 유한한 세포를 보존합니다.
• 유전적 불안정성 및/또는 선택적 압력으로 인해 발생하는 표현형 변이를 방지합니다.
• 일련의 실험에 사용할 수 있는 표준 시약 만들기(출처: 동물 세포 배양에 대한 ATCC 가이드).

1. 세포를 300-400 × g에서 4-5분간 원심분리하여 세포 펠릿을 얻습니다. 그런 다음 상층액을 무균으로 제거합니다.
2. 펠렛을 2°C~8°C의 냉동 보존 용액에 현탁합니다. 완전히 혼합하고 현탁액을 냉동바이알로 옮깁니다(예: 1.5mL 냉동바이알에 1.0mL의 현탁액을 넣습니다).
3. 속도 제어 냉동 시스템을 사용하여 세포를 서서히(분당 1°C~2°C) 얼린 후 바이알을 액체 질소(기체상)에 보관합니다. 또는 바이알을 냉동 용기에 넣고 밤새 -80°C로 옮깁니다. 다음 날 냉동바이알을 액체질소로 옮기세요 - 기체상을 권장합니다.
4. 액체 질소에 24시간 보관한 후 바이알 하나를 해동하여 동결 보존의 효율성을 확인합니다.