NK 세포 기능 및 표현형 평가
자연살해세포(NK세포)는 감염과 암에 대한 신체의 첫 번째 반응자 중 하나로 면역학적 감시를 수행합니다. NK 세포의 면역 반응 잠재력을 완전히 활용하려면 NK 세포의 생물학과 활동을 이해하는 것이 중요합니다. 면역 표현형, 기능적 활성 평가, 세포 생존력, 면역 표현형, 세포 분해 작용 단백질, 사이토카인, 케모카인의 프로파일링과 같은 활동을 위해 Incucyte® 라이브 세포 이미징 및 분석과 iQue® 3 고급 유세포분석을 사용합니다.
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인큐사이트로 종양 스페로이드의 ADCC 측정®. 처리하지 않았거나 항-CD3(10ng/mL) 및 IL-2(10ng/mL) 또는 허셉틴(0.08 - 50 ug/mL)이 있는 면역 세포가 있는 상태에서 SKOV-3 Incucyte® NucLight Red 스페로이드의 혼합 위상 및 형광 이미지입니다. 세포독성은 적색 형광 강도를 기준으로 정량화했습니다. 데이터는 활성화된 T세포 집단에 의한 종양 스페로이드의 파괴와 허셉틴에 의한 세포 독성을 보여줍니다.
자연살해세포 매개-항체 의존성 세포독성은 농도 의존적 표적 세포사멸, 그랜자임 생성을 유도합니다.
인코딩된 라지 종양 세포(20K/웰)를 두 개의 개별 기증자로부터 얻은 PBMC(200K/웰)와 공동 배양했습니다. PBMC를 세 가지 항-CD20 항체 중 하나로 배양했습니다: Ab-1(IgG1), Ab-2(IgG1) 또는 음성 대조군 Ab-3(IgA2). 농도 범위는 10ug/mL - 0.128 ng/mL였습니다.
4시간 후, 10µL 샘플을 분석하여 인간 NK 세포 살상 키트와 iQue® 3을 사용하여 종양 세포 살상을 평가했고, Granzyme A는 iQue® 인간 NK 세포 동반자 키트를 사용하여 측정했습니다. (A,B) 두 기증자에 의한 표적 세포 사멸은 항체에 대한 차별적 반응을 보여줍니다. (C,D) 그랜자임 A 생산은 농도 및 기증자에 따라 달라졌습니다. (E,F) 항-CD20 항체의 농도가 증가함에 따라 NK 세포에서 CD16의 검출이 감소했습니다. 이는 CD16의 흘림 또는 CD20 항체의 경쟁 때문일 수 있습니다.
사이토카인 자극은 종양 세포의 직접적인 NK 세포 매개 사멸을 향상시킵니다. 인코딩된 K562 종양 세포(20K/웰)를 16-18시간 동안 배양한 농축(음성 선별) 인간 NK 세포와 함께 배양한 후 배지 단독(비활성화된 NK 세포) 또는 200 U/mL IL-2 & 100 ng/mL IL-15를 함유한 배지에서 1:1 또는 5:1의 효과:목표 비율(활성화된 NK 세포)로 배양했습니다. 4시간 및 24시간 후, 10µL 샘플을 분석하여 iQue® Human NK 세포 사멸 키트와 iQue® 3을 사용하여 종양 세포 사멸을 평가했습니다. (A) 비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 4시간 동안 공동 배양한 후 표적 세포 생존율을 나타내는 히스토그램. (B,C) 종양 세포를 비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 (B) 4시간 또는 (C) 24시간 동안 공동 배양한 후 표적 세포 사멸 비율의 요약.
NK 세포 활성화는 표적 세포가 있을 때 유도되며 사이토카인 자극에 의해 더욱 강화됩니다. 인코딩된 K562 종양 세포(20K/웰)를 16-18시간 동안 배양한 농축(음성 선택)된 인간 NK 세포와 함께 배양한 후 200 U/mL IL-2 & 100 ng/mL IL-15를 함유한 배지(비활성화 NK 세포) 또는 5:1의 효과:표적 비율로 배양(활성화된 NK 세포)했습니다. 24시간 공동 배양 후, 10µL 샘플을 제거하고 iQue® 인간 NK 세포 사멸 키트와 iQue® 3 시스템을 사용하여 분석했습니다. (A) 활성화 마커, CD69 및 CD25의 발현. (B) IFNg 및 그란자임 B 분비물 생성. (C) 추가 사이토카인은 iQue® 인간 NK 세포 동반 키트와 iQue® 인간 NK 세포 살해 키트를 결합하여 병행하여 평가했습니다. NK = 자연 살해 세포. T = 표적 K562 종양 세포.
IL-2 및 IL-15로 활성화하면 활성화 표지자 발현과 그랜자임 B 및 CCL5(RANTES)와 같은 여러 이펙터 단백질의 분비가 증가했습니다. 이러한 효과는 NK 세포를 표적 세포와 함께 배양했을 때 더욱 강화되었습니다.
For further reading:1. Tarazona R et al. Current progress in NK cell biology and NK cell-based cancer immunotherapy. Cancer Immunol Immunother. 2020 May;69(5):879-899. doi: 10.1007/s00262-020-02532-9. Epub 2020 Mar 42. Hodgins JJ, Khan ST, Park MM, Auer RC, Ardolino M. Killers 2.0: NK cell therapies at the forefront of cancer control. J Clin Invest. 2019 Sep 3;129(9):3499-3510. doi: 10.1172/JCI1293383. Waggoner SN et al. Roles of natural killer cells in antiviral immunity. Curr Opin Virol. 2016 Feb;16:15-23. doi: 10.1016/j.coviro.2015.10.008. Epub 2015 Nov 164. Yao Z, Zheng Z, Wu K1, Junhua Z. Immune environment modulation in pneumonia patients caused by coronavirus: SARS-CoV, MERS-CoV and SARS-CoV-2. Aging (Albany NY). 2020 May 2;12. doi: 10.18632/aging.103101
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