면역학용 T세포
T세포는 다양한 유형의 병원성 유기체를 감지하고 이에 대응할 수 있는 고유한 표면 수용체를 가지고 있을 뿐만 아니라 신생 종양 세포와 같은 원치 않는 표적 세포를 방어하는 적응 면역에 매우 중요한 역할을 합니다. T세포 활성화와 증식은 면역 반응의 효과와 범위를 조절하는 데 필수적이며, 감염이나 질병과 싸우는 T세포 생물학을 이해하려면 동적 모델이 필요합니다.
인큐사이트 생세포 분석 시스템과 아이큐 고급 유세포분석 플랫폼은 활성화 및 클러스터링, 항체 내재화 분석, 화학 주성, 사이토카인 생산, 면역세포 사멸 및 내피세포 이동 분석과 같은 복잡한 공동 배양 모델 평가 등 T세포의 주요 기능을 평가하고 정량화하는 데 사용할 수 있습니다.
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냉동 보존은 세포 기반 치료제를 준비할 때 까다롭지만 반드시 필요한 과정입니다. 냉동 보존을 마스터하는 방법을 알아보세요.
위상차 이미징 및 라이브 세포 ICC(항-CD71 Fabfluor-488)를 사용한 PBMC 활성화 시각화. PBMC(30K/웰)를 항-CD3 및 IL-2 또는 매개체 대조군으로 처리하고 항-CD71-Fabfluor-488을 사용하여 표지했습니다. a) 무표지 위상차 이미징은 비활성화 및 활성화된 PBMC 간의 형태학적 차이를 감지하고, 살아있는 세포 ICC와 결합한 위상차 이미징은 활성화된 세포에서 상향 조절된 CD71+를 보여줍니다. b) 활성화는 세포 크기 증가, 세포 편심성 증가 및 큰 대 작은 하위 집합에서 CD71+의 상향 조절을 유도합니다.
iQue 고급 유세포분석 플랫폼 및 ForeCyt 소프트웨어를 사용한 T 세포 활성화 평가. 활성화된 T 세포의 비율과 분비된 IFNγ 수준의 용량 및 시간적 반응에 대한 다양한 치료법 간의 반응. 테스트한 각 화합물에 대해 관찰된 T 세포 활성화 표지자의 고유한 패턴.
인큐사이트 면역 세포 사멸 분석을 사용하여 면역 세포와 종양 세포의 상호 작용을 시각화합니다. (1) 작은 세포독성 T 세포와 표지된 큰 종양 세포(빨간색) 사이의 물리적 접촉. T 림프구 분열. (2) 세포독성 T 림프구의 공격을 받는 종양 세포: “죽음의 키스”. (3) 종양 세포 세포질 과립화 직후 카스파제 3/7 표지(녹색), 핵 응축 및 세포사가 뒤따르는 종양 세포. (4) 종양 세포 유사분열: 하나의 세포가 두 개가 됩니다.
인큐사이트 면역 세포 사멸 분석을 사용하여 종양 세포사멸 및 증식(선택 사항)을 실시간으로 측정합니다. 사용자 친화적인 Incucyte® 소프트웨어를 사용하면 세포 사멸 종양 세포(녹색 물체, 노란색 윤곽선)를 직접 이미지 기반으로 감지하고 살아있는 종양 세포(Incucyte® NucLight 빨간색 라벨 핵, 파란색 윤곽선)를 실시간으로 계수할 수 있습니다. 키네틱 판독은 치료 효과의 시간 의존성을 보여줍니다.
시간적 표적 세포 및 사이토카인 분석. SKOV-3 뉴클레오라이트 그린 세포를 PMBCS로 위드하고 CD3/CD28 다이나비즈로 활성화했습니다. (a) 인큐사이트로 분석한 목표 세포 수 시간 경과. (B) 상층액 샘플 10µl/일만을 사용한 (C) IFNγ 및 (D) TNFα에 대한 시간적 사이토카인 데이터는 TCA 키트(Qbead 또는 Assay Builder: IFNγ, 옵션 1 및 TNFα 옵션 2)의 Qbead 구성 요소를 사용하여 정량화했습니다(D) 목표 세포 수 (Incucyte) 및 사이토카인 (iQue3)의 시간 과정에서 AUC의 농도반응 곡선.
세포독성 및 표적 세포 군집화를 유도하는 CD3xCD19 BiTE 항체. 라모스 뉴클레오라이트 그린 세포에 PBMC를 시딩하고 BiTE 항체(항-hCD3xCD19) 또는 대조 항체(항-hCD3xβGAL)로 활성화했습니다. (A) 대조군 또는 (B) BiTE 항체가 존재할 때 72시간 후의 대표 이미지. 시간 경과 데이터(3시간마다 이미지)는 표적 세포의 세포량(C)과 클러스터링(E)을 추적했습니다. 밝기와 크기를 모두 고려한 녹색 통합 강도 지표의 배 변화(GCU x μm2)를 사용하여 표적 세포를 정량화했습니다. 대조 항체와 비교한 BiTE 항체 존재 시 표적 세포 사멸(D) 및 군집화(F)에 대한 72시간 농도반응곡선.
활성화된 PBMC가 종양 구상체 증식에 미치는 영향. 핵 제한 RFP를 안정적으로 발현하는 A549 종양 세포를 둥근 바닥 ULA 96웰 플레이트에 시드하고 3일 동안 스페로이드가 형성되도록 했습니다. 스페로이드가 형성되면, 항-CD3 및 IL-2 항체 칵테일의 유무에 관계없이 갓 분리한 PBMC와 함께 공동 배양했습니다. 항-CD3 및 IL-2 항체가 없을 때(비활성화, 상단 패널)와 있을 때(활성화, 하단 패널)에 PBMC가 스페로이드 증식에 미치는 영향을 비교한 Incucyte® HD 위상 및 형광 이미지. 활성화된 PBMC가 있을 때 스페로이드의 형광 강도가 현저히 감소하는 것을 확인할 수 있습니다. 시간 경과 플롯은 시간에 따른 형광 강도의 손실로 정량화된 스페로이드 세포독성을 보여줍니다. 데이터는 6시간 간격으로 7일에 걸쳐 수집되었습니다. 각 데이터 포인트는 평균 ± SEM, n=3 웰을 나타냅니다.
백혈구 유출 시각화. 피브로넥틴으로 배양된 HUVEC 단층에 CD3/CD28 Dynabead 활성화 1차 T 세포를 시딩하고 Incucyte® 시스템을 사용하여 매분 이미지를 획득했습니다. 노란색과 주황색 화살표는 백혈구가 HUVEC 세포 사이를 이동하여 결국 ClearView 인서트의 기공(파란색 원)을 따라 이동하는 것을 나타냅니다.
CXCL12를 향한 일차 T 세포의 혈관 외 유출. 피브로넥틴으로 배양한 HUVEC 단층에 CD3/CD28 다이나비드 활성화 1차 T세포를 시딩했습니다. 그런 다음 T 세포:HUVEC 단층 공동 배양을 포함하는 인서트를 표시된 농도의 CXCL12 그라데이션에 노출시켰습니다. Incucyte® ZOOM을 사용하여 30분마다 이미지를 획득하고 위상 분석을 수행했습니다. 약리학적 반응 분석은 t=6시간에 수행되었습니다. 각 데이터 포인트는 평균 ± SEM, n=4를 나타냅니다.
ClusteringZumwalde et al, 2013 J Immunol. October 1; 191(7): 3681–3693. doi:10.4049/jimmunol.1201954.
Immune cell killingMcCormack et al, 2013 Cancer Immunol Immunother. Apr; 62(4): 773–785. doi:10.1007/s00262-012-1384-4
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