성공적인 항체 발굴 프로그램을 위해서는 표적 반응성 후보를 신속하게 식별하고 특성화해야 합니다. 이 사례 연구는 표적 세포주 생성, 마우스 혈청 평가 및 하이브리드종 라이브러리 선별에 iQue® 세포분석 플랫폼의 고처리량 스크리닝(HTS)을 어떻게 사용할 수 있는지 보여 줍니다.
세포 표면 표적 항원을 감염시킨 클론을 신속하게 평가합니다. 높은 수준의 표적 항원을 발현하는 건강한 클론을 선택하여 다운스트림 하이브리드종 스크린에서 최적의 성능을 보장합니다.
표적 항원의 높은 표면 발현을 위해 400개의 엔지니어링 세포 클론을 선별했습니다.
5개의 96개 웰 플레이트를 1시간 내에 실행 및 분석합니다.
멀티플렉스 세포 기반 분석을 통해 건강한 성장과 높은 수준의 표면 항원을 발현하는 세포주를 단일 단계로 선별할 수 있습니다.
프로필 맵을 사용하여 높은 수준의 표적 항원을 발현하고 높은 세포 수로 성장한 클론을 시각화할 수 있습니다.
iQue Forecyt® 소프트웨어를 사용하여 시각화된 선별 화면 결과. 표적 항원을 라벨링하는 렌티바이러스로 세포를 형질전환하고 선택 압력 하에서 배양한 후 96개의 웰 플레이트에 분류했습니다. 세포 성장 후, 세포 분액을 분석 플레이트에 옮기고 iQue® 고처리량 선별 세포 분석 플랫폼을 사용하여 해당 항원에 특이적으로 형광 태그된 항체를 사용하여 표면 항원 발현을 테스트했습니다. 세포 성장의 지표로 세포 수를 동시에 측정했습니다.
프로필 맵은 표면에서 높은 수준의 표적 항원을 발현하는 세포 수가 많은 웰을 보여줍니다.
플레이트 뷰는 세포 표면의 표적 항원 발현 수준에 대한 세부 정보를 보여줍니다. 전송되지 않은 대조 세포의 발현 데이터가 오버레이되어 양성 클론을 쉽게 시각화 할 수 있습니다.
표적 항원에 대해 높은 수준의 항체를 생성하는 면역화된 마우스를 식별하기 위한 대규모 세포 기반 실험. 수십 마리의 면역 마우스 혈청을 동시에 테스트하여 최적의 항체 반응성을 가진 하이브리도마를 성공적으로 생성할 가능성을 높입니다.
면역을 받은 36마리의 쥐 혈청을 세포 표면 표적 항원에 결합하는지 테스트했습니다.
면역 전과 후의 쥐 혈청을 8배 희석하여 중복으로 테스트했습니다.
멀티플렉스 세포 기반 분석을 통해 표적 항원에는 결합하지만 다른 항원에는 결합하지 않는 혈청을 단일 단계로 선별할 수 있습니다.
히트 맵을 사용하여 표적 항원에는 결합하지만 다른 항원에는 결합하지 않는 높은 역가의 항체를 가진 마우스 혈청을 시각화합니다.
iQue Forecyt® 소프트웨어의 히트맵 기능을 사용하여 시각화한 테스트 결과입니다. 3개의 세포주를 형광 세포 인코딩 염료로 색상 코딩하고 함께 혼합하여 384개 웰 플레이트의 웰에 분주했습니다. 각 웰에 혈청 샘플을 추가한 다음 형광 검출 항체를 추가하고 세포 분석 플랫폼에 의한 iQue® 고처리량 선별(HTS)을 사용하여 플레이트를 분석했습니다. 표적 항원 접종 전과 접종 후 36마리 쥐의 혈청을 8배 희석하여 중복 테스트했습니다.
히트맵은 대조군 세포, 표적 항원을 발현하는 세포, 관련성이 있지만 무관한 항원을 발현하는 세포에 대한 항체 결합 결과를 보여줍니다.
표적 항원에 대한 결합은 검사하지만 대조 항원에 대한 결합은 검사하지 않는 높은 처리량의 멀티플렉스 스크리닝입니다. 전체 선별 및 데이터 분석이 하루 만에 완료되었습니다.
면역화된 2개의 다른 에서 9600개의 하이브리드종 클론을 선별했습니다.
25 x 384 웰 플레이트를 1일에 실행하고 분석했습니다.
멀티플렉스 세포 기반 분석을 통해 표적 항원에는 결합하지만 다른 항원에는 결합하지 않는 항체를 단일 단계로 선별할 수 있습니다.
28,800개의 데이터 포인트가 즉시 결합되어 결합 메트릭으로 처리되었습니다.
표적에는 결합하지만 제어 항원은 아닌 53개의 히트가 시각화되었습니다.
iQue Forecyt® 소프트웨어의 파노라마 기능을 사용하여 전체 화면의 결과를 시각화한 것입니다. 3개의 세포주를 형광 세포 인코더 염료와 함께 혼합하여 384개 웰 플레이트의 웰에 분주하여 컬러 코딩했습니다. 각 웰에 하이브리드종 상청액을 추가한 다음 형광 검출 항체를 추가했습니다. 표적 항원을 발현하는 세포를 면역시킨 두 마리의 생쥐에서 9,600개의 하이브리드종을 검사했습니다. 전체 선별은 하루 만에 완료되었습니다.
히트 맵(빨간색)은 대조군 세포, 표적 항원을 발현하는 세포, 관련성이 있지만 무관한 항원을 발현하는 세포에 대한 항체 결합 결과를 보여줍니다.
프로파일 맵(파란색)은 세 가지 세포 유형에 대한 결합 결과를 결합하여 표적 항원을 발현하는 세포에는 결합하지만 무관한 항원을 발현하는 세포나 음성 대조군 세포에는 결합하지 않는 항체를 표시합니다.
iQue Forecyt® 소프트웨어의 프로파일 맵 기능을 사용하여 원하는 특성을 가진 항체 클론을 선택할 수 있습니다.
과학자들과 모디퀘스트 리서치가 세포 분석 플랫폼의 다양한 단계에 걸쳐 iQue® 고처리량 선별(HTS)을 통합한 방법을 알아보세요....
이 전자책 컬렉션은 항체 선별 전략을 포함하여 항체 개발 워크플로우의 중요한 개발 및 어플리케이션에 중점을 둡니다.
생체 분자 결합 상호작용을 완전히 이해하려면 약물 발견 및 개발 과정에서 결합 메커니즘과 안정성에 대한 심층적인 이해가 필수적입니다.
유사한 친화도를 가진 약물은 다양한 결합 메커니즘과 동역학을 나타낼 수 있으므로 친화력 상수(KD)와 결합 및 해리상수(kA, kD)를 평가하는 것은 선도물질 선택에 매우 중요합니다. Octet® 라벨 프리 분석은 생체 분자의 친화도와 동역학을 실시간으로 특성화하는 데 유용한 도구입니다.
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리드 선택 및 정제 과정은 특정 요구 사항을 충족하고 개발 워크플로우의 다음 단계로 나아갈 수 있는 분자를 식별하는 데 중요한 역할을 합니다. 생물학적 제제의 경우, 리드 선택에는 생물학적 분자를 선별하여 원하는 기능적 및 생물물리적 특성을 가진 분자를 식별하고 최적화는 이러한 특성을 향상시키는 데 도움이 됩니다.
라벨 프리 분석은 이러한 공정의 속도와 효율성을 향상시킵니다. 바이오센서 분석은 처리량이 높고 친화도 순위, 대규모 항체 풀의 에피토프 비닝, Fc 수용체 결합, 글리코실화 선별, 항체-항원 특이성, 결합 특성화 및 역가 분석과 같은 다양한 어플리케이션을 위해 쉽게 개발할 수 있습니다.
Octet® BLI 플랫폼은 바이오의약품 개발의 효율성과 품질을 향상시킬 수 있는 다양한 분석 기능을 제공합니다. 이러한 기능에는 세포주 개발 중 샘플 선별, 바이오리액터에서 제품 역가 모니터링, 친화성 수지의 동적 결합 능력 측정, 정제된 제품의 특성 분석 등이 포함됩니다. 또한 Octet® BLI 플랫폼은 숙주세포 단백질(HCP) 및 잔류 단백질 A(RPA)와 같은 잠재적인 공정 생성 오염물질을 기존의 효소결합면역흡착분석(ELISA)보다 더 정밀하고 강력하게 신속하게 검출하고 모니터링할 수 있습니다.
약물 개발 워크플로우를 단순화하고 결과 도출 시간을 단축하여 바이오의약품 생산 중 비용을 최소화하면서 높은 품질과 안전 표준을 유지할 수 있습니다.
프레드 허치 암 센터의 연구원들은 iQue® 마우스 IgG 유형 및 역가 분석 키트를 활용하여 항체 발견 워크플로우를 간소화했습니다....
이 전자책은 현재의 항체 선별 도구에 대한 유용한 통찰력을 제공하는 게시물과 새로운 항체를 개발하는 연구자에게 어떻게 도움이 될 수 있는지 강조합니다....
iQue® 3 고처리량 선별 세포 분석 플랫폼은 연구자들이 고함량, 다중 분석을 수집하고 분석할 수 있게 해줍니다.
단일 웰에서 다중 분석을 통해 복잡한 세포 연구 문제를 해결하여 연구를 가속화하세요.
동역학, 친화도 및 항체/단백질 정량 측정을 위해 라벨 없이 실시간으로 분석할 수 있습니다.
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