신경종양학 개요

그림 1. mTOR 억제제 PP242는 SH-SY5Y 신경교모세포종 세포 모델에서 세포 건강에 영향을 미칩니다. SH-SY5Y 교모세포종 세포의 단일 배양물을 96웰 플레이트(5,000세포/웰)에 시드하고 3일 후 mTOR 억제제 PP242(50 - 0.21 µM)를 Incucyte^®Anexin V NIR(0.5%; 싸토리우스)이 포함된 배지에서 처리했습니다. 위상 및 형광 이미지는 Incucyte^® 라이브 세포 분석 시스템을 사용하여 실시간으로 캡처했습니다. 처리 후 72시간 시점에서 PP242 처리(16.7µM)와 매개체를 비교한 대표 이미지. 시간 경과 및 약물 반응 곡선은 농도 의존적인 상 합류의 감소와 그에 따른 세포사멸의 증가를 보여줍니다(pIC50 4.8). 데이터는 평균 +/-표준편차(3복제)로 표시됩니다.

그림 2. 고형 뇌종양 3D 스페로이드의 성장 속도 및 면적의 형태학적 변화 신경모세포종(SH-SY5Y) 및 교모세포종(U87-MG) 세포를 96웰 ULA 둥근 바닥 플레이트(5,000세포/웰)에 독립적으로 시드하고 단일 스페로이드(3일)를 형성하도록 허용했습니다. 인큐사이트에서 최대 10일 동안 구상체 형성 및 성장을 모니터링했습니다. 형성 후 7일째에 사용된 대표적인 브라이트필드 이미지와 세분화 마스크(파란색 윤곽선)가 표시되어 있습니다(A). 형성 후 시간 경과를 보면 구상체의 성장 속도와 면적이 다양하며, SH-SY5Y는 각각 6.6 x105 µm²와 5.0 x105 µm²로 U87에 비해 약간 더 큰 면적을 가집니다(B). 단일 스페로이드 편심도를 정량화하면 일단 형성된 U87 스페로이드는 둥글고 콤팩트하며 낮은 편심도를 유지하는 반면(1일차 0.33 vs 7일차 0.31), SH-SY5Y 스페로이드는 편심도 값이 더 높고 시간이 지나면서 증식에 따라 약간의 콤팩트함을 잃는 것으로 나타났습니다(1일차 0.55 vs 7일차 0.78). 데이터는 평균 +/- SEM, 12개 복제본(C)으로 표시됩니다.

그림 3. 인간 교모세포종 U87 단일 스페로이드 모델의 밸리데이션 및 견고성 Incucyte^® Nuclight-Orange를 안정적으로 발현하는 U87-MG 세포를 다양한 밀도(1,000 - 7,500 세포/웰)로 96웰 ULA 플레이트에 시드하고 3일 동안 Incucyte^®에서 형성 과정을 모니터링했습니다(A). 주황색 형광 지표를 사용하여 높은 시딩 견고성과 밀도에 따른 구상체 면적의 차이를 관찰했습니다(B). 데이터는 평균 +/- SEM으로 표시되며 CV% 값이 표시됩니다. 형성 후 시딩된 단일 스페로이드(7,500개 세포/웰, 3D)의 대표적인 브라이트필드 및 주황색 형광 이미지와 사용된 주황색 분할 마스크(빨간색 윤곽선)(C).

그림 4. 화학요법 화합물의 세포증식억제 및 세포독성 효과의 차이. 교모세포종(U87-MG) 세포를 96웰 ULA 둥근 바닥 플레이트(5,000세포/웰)에 시딩하고 10일 동안 인큐사이트에서 플레이트를 모니터링하면서 스페로이드(3일)를 형성하도록 허용했습니다(인큐사이트에서 10일 동안 모니터링). 형성 후, 스페로이드는 인큐사이트 아넥신 V NIR(A)의 존재하에 DNA 억제제 시스플라틴(0.82 - 200 µM) 또는 이중 mTOR 억제제 PP242(0.21 - 50 µM)로 처리되었습니다. 시간 코스는 매개체(B)와 비교하여 최고 농도의 시스플라틴(200 µM) 및 PP242(50 µM)에 대한 구상 브라이트필드 영역의 변화를 보여줍니다. 시간 경과 데이터와 약물 반응 곡선은 PP242가 강력한 세포증식억제 효과를 나타내며 고농도에서만 세포사멸을 일으키는 반면, 시스플라틴은 더 높은 수준의 세포독성을 나타냄을 보여줍니다(C). 데이터는 평균 +/- SEM으로 표시됩니다.

그림 5. 교모세포종 스페로이드 침입에 대한 화합물의 효과에 대한 고처리량 조사 U87-MG 세포를 ULA 원형 바닥 96웰 플레이트(2,500세포/웰)에 시드하고 스페로이드를 형성하도록 허용(3일)했습니다. 그런 다음 스페로이드를 항전이성 화합물의 연속 희석액으로 처리하고 Matrigel(4.5mg/mL)에 묻어 침윤을 유도했습니다(최대 10일). 인큐사이트 마이크로플레이트 용기 뷰는 치료가 구상체 침범(전체 구상체 영역, 노란색 윤곽선 마스크)에 미치는 영향을 3D 처리 후 보여줍니다(A). 사이토칼라신 D(2.34nm - 300nm) 및 PP242(0.01µM - 30µM)는 농도 의존적으로 U87-MG 구상체 침입을 억제하는 반면, 블레비스타틴(0.01µM - 30µM)은 거의 효과가 관찰되지 않았습니다(B).