세포 준비: 계대배양, 증식, 오염개입 방지

어떤 세포배양배지를 사용할 것인가에 대한 결정은 실험 설계 상 가장 중요한 부분 중 하나로 꼽을 수 있습니다. 어떤 세포를 배양할 것인지, 배양의 목적은 무엇인지에 따라 적합한 배지를 선택하여야 하며, 특히 서로 다른 세포주와 세포 유형에서의 세포 성장 요건이 판이하게 다르고, 이와 같은 요건을 충족할 수 있는 배지의 제형 또한 매우 다양하다는 점에 있어 파우더 배지 사용하여 연구소 내에서 직접 배지를 제작하여 사용하거나, 또는 완성되어 시판되는 기성품 배지를 선택적으로 사용할 수 있습니다. 연구소 내에서 직접 배지를 제작하는 경우에는 배지는 물론, 버퍼와 첨가제에 있어서도 고순도의 실험용수를 사용하는 것이 대단히 중요하며, 이러한 측면에서 실험용수의 품질은 세포배양 연구의 핵심요소 중 하나라고 할 수 있습니다.

오염원이 혼입되지 않은 고순도의 실험용수를 사용하게 되면 세포건강은 물론, 실험 간 일관된 세포행동을 기대할 수 있을 것이나 

만일 육안으로는 보이지 않지만 내독소, 무기이온, 유기혼합물 등 화학물질이나 바이오 의약품로 오염된 실험용수를 사용한다면 세포 성장과 형태학적 특성은 물론 세포행동에도 영향이 미쳐지게 됩니다. 통상적으로, mains water에서 발견되는 내독소 함량은 1-10 IU/mL 선이나, 국제표준에서는 세포배양용 실험용수에 0.1 IU/mL 이상의 내독소 함량을 허용하지 않고 있습니다. 올바른 실험용수 정제 계통을 활용, 내독소를 올바르게 정제해 낸 실험용수를 세포배양에 사용하는 것은 이와 같은 이유에서 대단히 중요하며, 이처럼 올바른 여과 솔루션을 사용하여 배양된 세포는 세포건강과 배양실험의 일관성, 재현성의 측면에서 탁월한 성능을 가져다 줄 것입니다.
 

부착성 세포주나 부유 세포주로 작업할 시 배양된 세포의 정기적인 계대배양이 필수적으로 시행되어야 합니다. 불행하게도 계대배양 공정에는 항상 오염의 가능성이 내포되어 있습니다. 일단 배양 플라스크 자체가 개방된 형태이며 세포의 사용 과정에서, 또 새로운 배지나 성분을 추가하는 과정에서 오염이 개입할 수가 있기 때문입니다.

다만, 신속하게 적용할 수 있는 적정한 무균기술을 수반하고 오염을 방지할 수 있는 장비와 오염되지 않은 시약을 사용함으로써 오염원이 세포배양에 영향을 미칠 수 있는 가능성을 줄일 수는 있을 것이며, 특히 무균 피펫팅 기술, 무균 필터 피펫, 피펫 팁을 사용할 수 있는 환경에라면 오염 개입 배제를 보다 신속하고 효과적으로 수행할 수 있습니다.

연구가 중단되는 사태가 발생하기 전에, 오염은 항상 미연에 방지되어야 합니다. 오염 문제는 세포 배양 작업에 수반되는 가장 큰 문제 중 하나입니다. 박테리아, 효모균, 사상균, 화학물질, 기타 바이오 의약품, 세포주 교차오염 등 다양한 원인으로부터 기인하는 오염은 세포의 성장, 형태학적/세포행동적 특성에 영향을 미쳐, 궁극적으로는 실험 결과에 영향을 미치고 프로젝트 진행 상의 지연을 초래할 수 있는 요인입니다.