Antibody Dependent Cellular Phagocytosis

항체의존 세포매개 대식작용

항체의존 세포매개 대식작용(ADCP)은 단일클론항체(mAb)를 사용해 종양세포를 표적화하여 면역세포에 의한 종양세포의 대식작용을 촉진하는 면역학적 제거 기전입니다. 종양세포에 특이적인 mAb는 항암 치료제로 각광받는 후보물질입니다. Her-2 양성 유방암에 흔히 사용되는 트라스투주맙을 비롯해 여러 치료제가 이미 허가를 받았습니다.

ADCP 치료제의 작용기전(MoA)은 대식세포나 단핵구의 Fc 수용체(FcR)를 활성화하고, 종양세포에서 과다발현되는 항원에 특이적으로 결합할 수 있다는 특징을 바탕으로 합니다. 항체를 개발할 때에는 특성분석을 통해 분자가 ADCP를 포함한 여러 MoA를 유도할 수 있는지 파악하는 것이 중요합니다. 그러려면 분자의 치료잠재력을 확인할 수 있는 시험관 내 분석이 필요합니다. 기존의 ADCP 측정 기술에는 흔히 다음과 같은 단점이 있습니다.

획득 처리량이 낮은 장비를 사용해 대량의 샘플이 필요합니다(예: 전통적인 유세포분석).
프로토콜 최적화, 고정, 반복적인 세척 등 필요한 단계가 많아 번거롭고 시간이 오래 걸립니다.
질적 결과만 제공하거나 수동으로 데이터를 분석해야 합니다.
실제 ADCP 신호를 정량화하는 대신 인공물을 측정합니다.
유전자 조작 리포터 세포주에 의존합니다.

iQue^® 항체의존 세포매개 대식작용 솔루션은 iQue^® 인간 항체의존 세포매개 대식작용 키트를 사용해 쉽고 간편한 공정으로 살아 있는 타깃 세포와 CD14 양성 일차 작동세포의 공동국소화를 정량화하는 고처리량 ADCP 측정 기능을 제공합니다. iQue^® 고성능, 고처리량 유세포분석기와 자동 통합 분석 기능을 활용해 ADCP에 대한 테스트 표적 항체의 약리학적 분석 결과를 즉시 확인하세요.

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개요

간단한 분석을 통한 ADCP 이벤트 검출 및 정량화

그림 1. iQue^® 인간 항체의존 세포매개 대식작용 키트 분석 원리

iQue^® 확산 및 라벨링(B/Green) 염료로 표지한 타깃 세포를 테스트 항체와 함께 96웰 또는 384웰 플레이트에 배양한 다음, 무표지 작동세포(PBMC 또는 농축된 단핵구나 대식세포 군집)를 첨가합니다.

iQue^® 세포막 완전성(R/Red) 염료를 사용해 살아 있는 세포와 죽은 세포를 분리합니다. ADCP는 타깃 세포 라벨에 양성인 살아 있는 CD14 양성 작동세포의 비율로 정량화합니다.

키트에 형광단 조합을 사용하므로 iQue^® BR 및 VBR 구성과 모두 호환됩니다.

주요 장점

정량적 데이터 확보

ADCP 측정 재현성과 특이성이 뛰어나 약리학적 분석에 적합합니다.

그림 2. Forecyt를 사용한 효율적인 데이터 분석으로 EC50을 자동 계산해 약물 효능 순위 결정

B/Green으로 라벨링한 Ramos 세포(2.5K/웰)를 PBMC와 함께 96웰 플레이트에 시딩했습니다(작동세포:타깃세포 = 20:1). 그리고 IgG1, IgG1NQ(비글리코실화), IgG2, IgG4 등 여러 리툭시맙 mAb 동형 물질을 사용해 ADCP를 자극했습니다. 세포는 iQue^® 항체의존 세포매개 대식작용 키트로 라벨링했고, ADCP는 iQue^® 3으로 분석했습니다. ADCP(%)는 살아 있는 세포 군집 중 CD14와 B/Green 라벨에 양성인 세포의 비율로 정의합니다.

1. 인비보젠(Invivogen): 세포생물학 연구용 시약 및 툴

고처리량 분석 수행

검증된 시약으로 96웰 또는 384웰 플레이트의 ADCP를 신속하게 정량하여 발견 속도를 높여 보세요.

그림 3. 단일 384웰 분석 플레이트로 다양한 E:T(작동세포:타깃세포) 비율을 사용해 여러 공여자의 PBMC로부터 ADCP 반응 분석

비부착 Ramos 타깃 세포(2.5K/웰)를 트룩시마(CD20-IgG1) 및 PBMC와 함께 배양했습니다(작동세포:타깃세포 = 5:1, 10:1, 20:1). 음성 대조군으로 항체가 없는 웰도 포함했습니다. ADCP는 iQue^® 인간 항체의존 세포매개 대식작용 키트와 iQue^® 3으로 분석했습니다.

(A)는 ADCP(%) 히트 맵, (B)와 (C)는 각각 공여자 1과 2의 PBMC에 따른 ADCP(%)의 농도반응곡선입니다.

생리학적으로 관련성 높은 세포 모델 분석

다양한 부착 및 비부착 타깃 세포에 대해 일차 작동세포별 ADCP를 분석할 수 있습니다.

그림 4. 유연한 혼합배양 모델을 사용해 부착성 타깃 세포에 대한 치료제의 대식작용 효과 구별

B/Green으로 라벨링한 부착 AU565 세포(10K/웰)를 트라스투주맙(Her2-IgG1 mAb) 및 분리된 단핵구와 함께 배양했습니다(작동세포:타깃세포 = 5:1). 세포는 iQue^® 인간 항체의존 세포매개 대식작용 키트로 라벨링하고 iQue^® 3으로 분석했습니다.

(A) Forecyt 화면으로 본 플레이트의 모습입니다. ADCP 이벤트(살아 있는 CD14 및 B/Green 양성 세포)와 트라스투주맙 농도의 증가를 볼 수 있습니다.

(B) 대조군 항체(BGal-IgG1)와 비교하여 트라스투주맙에 대한 반응으로 ADCP(%)가 증가했습니다.

생산성 최대화

실시간 데이터 분석 및 새로운 시각화 툴을 통해 빠른 시간 안에 답을 얻어낼 수 있습니다.

그림 5a. iQue^®로 샘플을 획득하는 동시에 사전 설정된 게이팅 템플릿 자동 완성

iQue^® 인간 항체의존 세포매개 대식작용 키트에 포함된 템플릿을 iQue^® Forecyt로 불러오면 공동국소화된 B/Green 라벨링 타깃 세포와 CD14 양성 단핵구를 즉시 정량화할 수 있습니다. 단일 세포 게이트를 생략하고 간편한 3단계 게이팅 전략을 사용해 실제 ADCP 신호를 측정할 수 있습니다.

그림 5b. iQue^® Forecyt 소프트웨어의 자동 데이터 분석으로 즉시 ADCP 결과 확인

게이팅 템플릿이 적용되면 간편한 iQue^® Forecyt 분석 플랫폼을 사용해 약리학적 분석을 수행하고, 명확하고 간단한 포맷으로 결과를 동시에 확인할 수 있습니다. 아래는 데이터 시각화의 예시입니다.

(A) 윤곽 그래프를 통해 CD14 양성 군집이 뚜렷하게 게이팅되었음을 볼 수 있습니다. (B) PBMC와 Ramos 또는 Raji 타깃 세포에 따른 ADCP(%) 반응을 나타낸 히트 맵입니다. (C) (B)의 데이터를 농도반응곡선으로 나타냈습니다. iQue^® Forecyt에서 즉시 내보낸 Ramos와 Raji의 EC50 값은 각각 29.1 및 24.8ng/mL입니다.