고정형 생존성 염료
처리에 대한 세포의 반응을 평가할 때 특정 반응을 최종 데이터 분석에서 배제하려면 세포 생존성을 측정하는 것이 중요합니다. 유세포분석으로 세포 내 면역표현형을 분석할 때에는 고정형 생존성 염료를 사용해야 고정 후에도 염색 패턴을 보존하여 세포 군집을 올바르게 식별할 수 있습니다. 지금까지 생존성 정량을 위해 다양한 고정형 생존성 염료가 개발되었지만, 고정 프로토콜과 호환되지 않아 데이터 세트 내 인공물을 발생시킬 가능성이 있는 경우가 많았습니다.
iQue® 고정형 생존성 염료는 세포 라벨링부터 분석까지 간소화된 워크플로를 통해 96웰 포맷으로 고정이나 투과화 이후 샘플의 생존성을 정확하게 측정합니다. 그 어느 때보다도 쉽게 세포 내 유세포분석 작업을 위해 세포 생존성을 정확히 파악할 수 있습니다.
적용분야
분석 개요
iQue® 고정형 생존성 염료는 살아 있는 세포와 사멸한 세포를 구별하는 아민 반응성 막불투과성 염료입니다. 염색된 세포를 고정하고 투과화할 수 있어 강도 하락 없이도 나중에 세포 내 추가 염색이 가능합니다.
iQue® 고정형 생존성 키트는 BR 및 VBR로 설정한 iQue® 플랫폼 사용에 대해 검증된 제품입니다. 세포 라벨링부터 분석까지, 간소화된 과정을 통해 세포 생존성, 세포 표면 및 세포 내 타깃을 정량적으로 분석할 수 있습니다. 또한, 3가지 컬러를 선택할 수 있어 다중 색상 흐름 패널이 필요한 경우에도 사용할 수 있습니다. 키트에는 간편한 사용을 위해 게이팅 전략 및 분석용 프리셋 템플릿이 포함되어 있습니다.
기초 분석 과정
- 무단백 PBS로 세포를 세척합니다.
- 무단백 PBS로 희석한 염료를 사용해 세포를 20~30분 동안 염색합니다.
- 필요에 따라 다운스트림 염색 절차(표면 표지자 염색, 고정/투과화, 세포 내 염색)를 수행합니다.
- iQue® 플랫폼(BR 및 VBR 설정)으로 플레이트를 분석합니다.
주요 장점
고정 후 염색 보존 - 고정이나 투과화 이후에도 형광 염색 강도가 유지되므로 살아 있는 세포와 죽은 세포를 구별할 수 있습니다.
인공물 없이 세포 내 타깃 분석 가능 - 표면 및 세포 내 표지자 발현을 동시에 모니터링하고, 죽은 세포로 인한 인공물을 줄일 수 있습니다.
귀중한 샘플 절약 - 20µL의 세포만 필요하므로 샘플을 절약해 이후 후속 분석에서 여러 번 사용할 수 있습니다.
고정 후 염색 보존
형광염색이 유지되어 고정이나 투과화 이후에도 염색 강도가 떨어지지 않기 때문에 살아 있는 세포와 죽은 세포를 구별할 수 있습니다.
그림 1. 고정/투과화 세포와 미고정 세포의 iQue® 고정형 생존성 염료 형광염색 비교
생존성 있는 Jurkat 세포와 65°C에서 10분 동안 열처리하여 생존성을 제거한 Jurkat 세포의 혼합물을 iQue® 고정형 V/Blue (A), B/Green (B), 또는 R/Red (C) 염료로 염색했습니다. 염색한 세포는 고정하거나 고정하지 않고 3.7% 포름알데히드, 0.1% 사포닌으로 PBS에서 투과화했습니다. 모든 샘플은 iQue® 장비로 획득했고, 히스토그램은 키트에 포함된 프리셋 템플릿을 사용해 게이팅한 싱글렛을 바탕으로 생성했습니다.
인공물 없이 세포 내 타깃 분석 가능
표면 및 세포 내 표지자 발현을 동시에 분석하고, 죽은 세포로 인한 인공물 발생을 최소화합니다.
그림 2. iQue® 고정형 생존성 염료로 염색한 PBMC의 세포 내 IFN-γ 발현 검출 및 분석 예시
PBMC를 CD3 항체 코팅 플레이트에서 10ng/mL의 인간 재조합 IL-2와 함께 이틀 동안 배양했습니다. 그리고 분석 4시간 전에 단백질 운반 억제제 모넨신(2µM)을 세포 배양액에 첨가했습니다. 활성화된 PBMC(20µL)를 96웰 분석 플레이트의 각 웰에 첨가하고, iQue® 고정형 생존성(V/Blue) 염료로 염색한 뒤, 다시 T세포 표면 표지자 CD3으로 염색했습니다. 그 다음, Cytofix/Cytoperm 용액(BD Biosciences)으로 세포를 고정 및 투과화한 뒤 PE 결합 마우스 항인간 IFN-γ 항체로 염색했습니다. 샘플은 iQue® 장비로 획득했고, 데이터는 Forecyt 소프트웨어로 분석했습니다. A, 모든 셀에 대한 게이트. B, 싱글렛에 대한 게이트. C, iQue 고정형 생존성(V/Blue) 염료를 사용해 죽은 세포 배제. D, CD3에 양성인 살아 있는 세포의 IFN-γ 발현 그래프.
귀중한 샘플 절약
20µL의 세포만 필요하므로 샘플을 절약해 이후 후속 분석에서 여러 번 사용할 수 있습니다.
그림 3. 소량의 샘플(20µL/웰)로도 가능한 간편 분석 프로토콜로 세포 및 설정 시간 절약
주문 정보
플랫폼: iQue® 3/iQue® Screener Plus - VBR 및 BR Configuration과 호환 | |||
| 제품 | 크기 | 카탈로그 번호 | |
| iQue® 고정형 생존성(V/Blue) 키트 | 5 x 96웰 | BA-97116 | |
| iQue® 고정형 생존성(B/Green) 키트 | 5 x 96웰 | BA-97119 | |
| iQue® 고정형 생존성(R/Red) 키트 | 5 x 96웰 | BA-97122 | |
