T세포 활성화
항원과 공동자극신호에 의해 미성숙 T세포가 활성화되면 CD4에 양성인 조력 T세포와 CD8에 양성인 세포독성 T세포의 클론 증식이 시작됩니다. 또한, T세포 확산과 더불어 다양한 신호전달경로가 활성화되면서 기능하는 세포 표면 표지자가 발현되고 사이토카인이 분비됩니다.
면역체계를 이용해 암을 표적화하는 치료제(이중항체, 관문억제 항체, CAR-T 세포) 시장은 점점 성장하고 있습니다. T세포가 특정 자극에 어떻게 반응하는지 이해하고, 이를 통해 약물이 면역체계를 얼마나 잘 활용할 수 있는지 파악하려면 활성화 프로파일을 모니터링하고 정량화할 수 있어야 합니다.
분석 개요
T세포 활성화, 확산, 사이토카인 분비를 단일 웰 Multiplex 방식으로 측정할 수 있는 접근법을 알아보세요.
그림 1. 인간 T세포 활성화 키트 분석 원리. 서로 다른 T세포 표현형에 대해 3개의 활성화 표지자, CD69(초기), CD25(후기), HLA-DR(말기)의 발현을 프로파일링합니다. 2개의 작동 사이토카인(IFNγ 및 TNFα) 역시 2-plex Qbeads를 사용해 샌드위치 면역분석 포맷으로 같은 웰에서 정량화합니다. 이 그림에는 포함되지 않았지만 T세포 확산이나 라벨링된 타깃 세포 또한 동시에 측정할 수 있습니다.
주요 장점
생리학적으로 관련성 높은 모델로 T세포 활성화에 대해 폭넓은 생물학적 인사이트 확보
그림 2. 인간 T세포 활성화 프로파일의 변화를 보여주는 키나아제 억제제 화면
키나아제 억제제(20µM) 패널로 1시간 동안 PBMC를 처리했습니다. 그리고 CD3/CD28 Dynabead를 첨가해 24시간 동안 활성화를 자극했습니다. T세포 활성화 키트 및 사이토카인 프로파일링 키트와 iQue 시스템으로 10µL의 샘플을 분석했습니다.
(A) CD4 및 CD69 양성 게이팅 전략을 나타낸 플레이트 뷰입니다. 초록색 박스는 기본 배지 대조군을, 빨간색 박스는 시클로스포린 대조군을, 노란색 박스는 그래프 B-D에 나타난 화합물(1: 룩소리티닙, 2: 비신돌릴말레이미드 I, 3: AZD 7762)입니다.
(B, C) CD4 및 CD8에 양성인 세포의 CD69, CD25, HLA-DR 발현을 나타냅니다.
(D) PBMC의 IFNγ 및 TNFα 사이토카인 분비를 보여줍니다.
표면 단백질 & 사이토카인 발현 동시 정량
그림 3. 다른 공여자와 분리한 PBMC로부터 분비되는 사이토카인과 활성화 프로파일의 변화 정량
혼합배양 분석을 위해 SKOV-3 세포를 3명의 공여자로부터 채취한 PBMC(10K/웰)와 함께 시딩했습니다. 활성화는 CD3/CD28 Dynabeads로 유도했습니다. 4일 후 부착세포 리프팅 프로토콜에 따라 세포를 리프팅한 뒤, T세포 활성화 세포 및 사이토카인 프로파일링 키트를 사용해 분석했습니다. (A-C) 초기(CD69), 후기(CD25), 말기(HLA-DR) T세포 활성화의 표지자 발현을 나타냅니다. (D) 각 공여자의 IFNγ 분비를 보여줍니다.
쉬운 사용과 해석, 사전 정의된 게이팅 전략
그림 4. iQue Forecyt®의 사전 정의된 게이트로 인간 T세포 하위 군집 자동 표현형 분석
최소한의 샘플 조작: 적은 샘플 필요량, 단 한 번의 세척, 희석 없음
- 세포와 상층액을 하나의 샘플로 채취하는 간편 프로토콜로 분석과정을 간소화합니다.
- 라벨링이나 보정 최적화 단계가 필요하지 않습니다.
그림 5a. T세포 활성화 키트의 쉬운 프로토콜을 통해 T세포 표현형 및 사이토카인 분비 분석
그림 5b. 쉬운 수정 프로토콜을 사용해 타깃 세포를 분석에 포함시키고, T세포 활성화 키트로 T세포 표현형 및 사이토카인 분비 분석
자주 묻는 질문
iQue® 인간 T세포 활성화 키트는 활성화된 T세포의 면역표현형 분석과 사이토카인 검출을 동시에 수행하는 Multiplex 접근법을 사용합니다. 적절한 항체가 제공되므로 활성화된 T세포를 식별할 수 있고, iQue Qbeads®를 사용해 분비된 IFN 및 TNF를 검출하고 정량화할 수 있습니다. 두 구성요소 모두 생존성 염료와 함께 각 분석 웰에 첨가한 뒤 세포 및 상층액 샘플 혼합물과 배양하면 됩니다. 그 다음, 프리셋 게이팅 전략이 세포와 비드의 형광 신호를 분리해 주고, 내장된 템플릿을 자동으로 채워 T세포 군집과 사이토카인 농도 데이터를 보여줍니다.
iQue® 인간 T세포 활성화 키트를 사용하면 하나의 분석 플레이트로 시간에 따라 여러 번의 측정을 수행할 수 있습니다. 극소량(10µL)의 세포 및 상층액 샘플로도 T세포 활성화 키트를 사용해 분석을 수행할 수 있기 때문에 각 샘플을 후드에서 무균 상태로 취한 뒤 분석 플레이트를 배양기로 되돌려놓고, 시간이 지난 뒤 다음 샘플을 분석하면 됩니다. 샘플을 취하기 전에는 고른 샘플링을 위해 내용물을 잘 정제하는 것이 권장되지만, 이 과정은 세포에 영향을 미치지 않으며 여전히 적은 양의 샘플로도 분석을 수행할 수 있습니다.
iQue® 인간 T세포 활성화 키트를 iQue® 인간 T세포 컴패니언 키트와 함께 사용하면 이미 T세포 활성화 키트에 포함된 사이토카인 이외에도 최대 6개의 인간 사이토카인을 추가로 측정할 수 있습니다. 또한, 싸토리우스는 다양한 사이토카인 및 케모카인 검출 iQue Qbeads®를 제공하고 있으므로 고객이 T세포 활성화 키트와 함께 원하는 추가 패널을 구성해 Multiplex 방식으로 사용할 수 있습니다. 10µL 샘플 하나로 최대 30개의 분비 단백질을 분석할 수 있으며, 50개 이상의 분석물 중 원하는 옵션을 선택해 정량화할 수 있습니다. 싸토리우스의 포트폴리오에 포함되어 있지 않은 분석물의 경우, iQue Qbead® Devscreen 시약을 사용해 원하는 캡처 항체나 타깃 단백질과 결합할 수 있는 맞춤 솔루션을 이용해 보시기 바랍니다.
주문 정보
T세포 활성화 키트 | ||
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플랫폼 | iQue3 VBR configuration과 호환 | |
크기 | 카탈로그 번호 | 지금 주문하기 |
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