T세포 탈진
T세포 탈진은 만성적인 자극으로 인한 T세포의 기능 장애를 가리키는 폭넓은 의미의 용어입니다. 탈진한 T세포는 PD-1, LAG-3, TIM-3 등 억제 표지자를 과발현하거나 전염증성 사이토카인(IFNγ 및 TNFα) 분비 능력에 장애를 보이는 등 뚜렷한 표현형을 나타냅니다. 탈진이 흔히 발생하는 종양 미세환경의 경우, T세포가 세포독성 기능을 잃고 암세포 살해 능력의 효과도 상실하게 됩니다.
특히 관문억제 항체 등을 통해 CAR-T 세포를 생성하는 등 탈진 상태를 되돌리거나 극복하는 방법은 많은 관심을 받고 있습니다. T세포 탈진 문제 해결 시나리오를 모방할 수 있다면 이 현상에 대해 훨씬 풍부한 인사이트를 확보할 수 있을 것입니다.
분석 개요
T세포 탈진, 확산, 사이토카인 분비를 단일 웰 Multiplex 방식으로 측정할 수 있는 접근법을 알아보세요.
그림 1. iQue® 인간 T세포 탈진 키트 분석 원리. T세포 표현형 중 3개의 탈진 표지자, PD-1(초기), LAG-3(중기), TIM-3(후기)의 발현을 프로파일링합니다. 2개의 작동 사이토카인(IFNg 및 TNFα) 역시 2-plex Qbeads를 사용해 샌드위치 면역분석 포맷으로 같은 웰에서 정량화합니다. 이 그림에는 포함되지 않았지만 T세포 확산이나 라벨링된 타깃 세포 또한 동시에 측정할 수 있습니다.
주요 장점
표면 단백질 & 사이토카인 발현 동시 정량
그림 2. 억제 수용체를 과발현하고 낮은 농도의 작동 사이토카인 TNFα를 생성하는 탈진 T세포
아직 자극을 받지 않은 미탈진 상태나 탈진한 상태의 CD3 양성 T세포를 시딩했습니다(200K/웰). 탈진 T세포는 Dynabeads CD3/CD28로 자극했고(비드:세포 = 1:1), 2~3일 간격으로 재자극(총 자극 5회)한 뒤 시딩했습니다. 웰 내 활성화는 다양한 밀도의 Dynabeads CD3/CD28로 유도했습니다. 대조군 웰에는 Dynabeads를 포함하지 않았습니다. 24시간 후, iQue® 인간 T세포 탈진 키트와 iQue® 3을 사용해 10µL의 샘플을 분석했습니다.
생리학적으로 관련성 높은 모델로 T세포 활성화에 대해 폭넓은 생물학적 인사이트 확보
그림 3. 탈진한 T세포에서 3일 이상 지속되는 LAG-3 과발현
아직 자극을 받지 않은 미탈진 상태나 탈진한 상태의 CD3 양성 T세포를 시딩했습니다(200K/웰). 탈진한 T세포를 Dynabeads CD3/CD28로(비드:세포 = 1:1) 반복 자극(2~3일 간격, 총 5회)했습니다. 웰 내 활성화는 Dynabeads CD3/CD28로 유도했습니다. 24시간 후, iQue® 인간 T세포 탈진 키트를 사용해 10µL의 샘플을 분석했습니다.
쉬운 사용과 해석, 사전 정의된 게이팅 전략
그림 4. iQue Forecyt®의 사전 정의된 게이트로 탈진 T세포 하위 군집 자동 표현형 분석
최소한의 샘플 조작: 적은 샘플 필요량, 단 한 번의 세척, 희석 없음
- 세포와 상층액을 하나의 샘플로 채취하는 간편 프로토콜로 분석과정을 간소화합니다.
- 라벨링이나 보정 최적화 단계가 필요하지 않습니다.
그림 5a. iQue® 인간 T세포 탈진 키트를 사용한 쉬운 T세포 표현형 및 사이토카인 분비 분석 프로토콜
그림 5b. 쉬운 수정 프로토콜을 사용해 타깃 세포를 분석에 포함시키고, iQue® 인간 T세포 탈진 키트로 쉬운 T세포 표현형 및 사이토카인 분비 분석
자주 묻는 질문
마그네틱 비드를 사용해 T세포 탈진을 유도하는 경우, iQue® 고성능 유세포분석 플랫폼으로 샘플을 채취하기 전에 비드를 제거하지 않아도 됩니다. 분석을 시작하면 비교적 크기가 작은 비드로부터 세포가 게이팅되고, 사전 게이팅 템플릿을 통해 사이토카인 TNFα 및 IFNγ를 검출하는 iQue Qbeads®만 분석되므로 신속하게 결과를 확보할 수 있습니다.
이 키트를 사용하면 T세포 탈진 표지자와 세포 기능의 역전을 통해 탈진한 세포보다 IFNγ 및 TNFα가 많이 생성되는 것을 보일 수 있습니다. 그러나 이처럼 세포독성을 직접적으로 측정하려면 싸토리우스 iQue® 인간 일반면역세포 살해 키트나 다른 직접적인 세포독성 측정법을 사용해 해당 기능 특성을 분석하는 것이 낫습니다.
민감도가 높고 분석을 간소화할 수 있는 iQue® 플랫폼을 사용하면 iQue® 인간 T세포 탈진 키트를 통해 겨우 수천 개의 탈진 T세포도 검출할 수 있습니다. 최소 1 x 106개/mL의 세포로 분석 플레이트를 구성하고, 이 샘플의 10µL(세포 10,000개)를 분석 플레이트로 옮기는 것을 권장합니다. 분석에 더 많은 세포가 필요하면 분석 조건을 최적화하거나 세포 샘플을 추가로 채취해야 할 수 있습니다. iQue® 데이터 획득 프로토콜은 필요에 따라 쉽게 수정해 더 많은 샘플을 획득하는 데 사용할 수 있습니다.
주문 정보
| iQue® 인간 T세포 탈진 키트 | ||
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| 플랫폼 | iQue® 3 / iQue® Screener Plus - VBR configuration과 호환 | |
| 크기 | 카탈로그 번호 | 지금 주문하기 |
1 x 96웰 | 97069 | iQue® 인간 T세포 탈진 키트 |
5 x 96웰 | 97070 | |
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