T세포 살해 — 세포 및 사이토카인 프로파일링

T세포 살해

세포독성 T 림프구(CTL)는 면역체계의 중요한 구성요소로, 감염된 세포와 악성 세포를 제거하는 데 중요한 역할을 합니다. 면역체계의 기능적(CD8+) 하위 군집인 CTL은 퍼포린을 사용해 타깃 세포막에 그랜자임이 통과할 수 있는 구멍을 만들어 타깃 세포의 세포자멸사를 유도합니다.

면역세포 매개 세포독성은 단일클론항체, BiTE, CAR, Truck 등 다양한 치료제로 유도할 수 있습니다. 면역체계의 힘을 활용하는 방식은 암을 물리치는 강력한 무기로 여겨지고 있으며, 그동안 면역항암제 분야에서 유망한 결과를 보여주었습니다. 기존의 T세포 표현형 및 세포독성 기능 분석 기술에는 흔히 다음과 같은 단점이 있습니다.

사이토카인, 세포독성, 표지자 발현을 별도의 장비를 사용해 따로 분석해야 합니다.
크롬방출분석법 등, 노동력이 많이 필요한 간접적 세포독성 측정법을 사용합니다.
여러 출처에서 수집한 데이터를 직접 분석하고 취합해야 합니다.
프로토콜 최적화, 고정, 반복적인 세척 등 필요한 단계가 많아 시간이 오래 걸립니다.

iQue^® 인간 T세포 살해 솔루션은 iQue^® 인간 T세포 살해 키트를 사용해 높은 처리량으로 타깃 세포 살해와 T세포 표현형 및 활성화 표지자 발현을 동시 분석하고, 분비된 작동 단백질 및 사이토카인을 정량화합니다. iQue^® 고성능 고처리량 유세포분석과 통합 iQue Forecyt^® 소프트웨어의 실시간 데이터 분석 기능을 활용해 면역치료제 신약 발견 과정을 향상시켜 보시기 바랍니다.

상세 정보 요청하기

분석 개요

그림 1. iQue^® 인간 T세포 살해 키트 분석 원리

CD8 양성 T세포를 프로파일링하면 활성화 표지자 CD25와 탈진 표지자 PD-1의 발현을 확인할 수 있습니다. 2개의 작동 사이토카인(IFNγ 및 그랜자임 B) 역시 2-plex Qbeads를 사용해 샌드위치 면역분석 포맷으로 같은 웰에서 정량화합니다. 이 그림에는 포함되지 않았지만 T세포 확산이나 라벨링된 타깃 세포 또한 동시에 측정할 수 있습니다.

주요 장점

생물학적 인사이트 확보

생리학적으로 관련성 있는 모델로 T세포 살해를 연구할 수 있습니다

그림 2. 6일에 걸쳐 농도에 따른 표지자 발현과 사이토카인 분비를 유발하는 CD3xCD19 이중 특이적 T세포 관여항체(BiTE)

혼합배양 분석을 위해 Incucyte^® Nuclight Green으로 라벨링한 Ramos 세포(15K/웰)를 PBMC(75K/웰)와 함께 시딩했습니다. 활성화는 CD3xCD19 BiTE 항체로 유도했습니다. 세포를 정제한 뒤 세포 및 상층액 샘플을 iQue^® 인간 T세포 살해 키트로 분석했습니다. 타깃 생존성(A)은 6일 동안 농도와 함께 감소합니다. CD8 양성 세포의 T세포 활성화 표지자(B)와 탈진 표지자(C) 발현은 3일 차까지 증가하다가 감소하기 시작합니다. (D)는 IFNγ, (E)는 그랜자임 B 분비를 나타냅니다.

생산성 향상

혼합된 세포와 비드 분석 포맷을 사용해 표지자 발현과 분비된 사이토카인을 동시 측정합니다

그림 3. 농도와 시간에 따른 T세포 활성화, 탈진, 살해 표지자의 변화를 유발하는 Immunocult CD3/CD28/CD2 활성제

혼합배양 분석을 위해 Incucyte^® Nuclight Green으로 라벨링한 Ramos 세포(15K/웰)를 PBMC(75K/웰)와 함께 시딩했습니다. 활성화는 Immunocult CD3/CD28/CD2로 유도했습니다. 사용된 최고 농도는 권장 자극과 동일합니다(세포 1e6개/mL당 25µL). 세포를 정제한 뒤 세포 및 상층액 샘플을 채취해 iQue^® 인간 T세포 살해 키트로 분석했습니다. (A)는 CD8 양성 세포의 후기 T 세포 활성화 표지자(CD25) 발현을 나타냅니다. (B)는 CD8에 양성인 세포의 T세포 탈진 표지자(PD-1) 발현을 나타냅니다. (C)는 IFNγ, (D)는 그랜자임 B 분비를 나타냅니다.

데이터 분석 간소화

실시간 데이터 분석 및 새로운 시각화 도구로 정량적 분석 결과를 신속하게 생성합니다.

그림 4. iQue Forecyt^®의 사전 정의된 게이트로 탈진 T세포 하위 군집 자동 표현형 분석

3명의 공여자로부터 채취한 PBMC(120K/웰)를 Incucyte^® Nuclight Green으로 라벨링한 Ramos 세포(40K/웰)와 함께 혼합배양하고, 다양한 밀도의 Dynabead CD3/CD28로 활성화했습니다. 분석은 3일 차에 iQue^® 인간 T세포 살해 키트로 수행했습니다. (A)는 양성 대조군(Dynabead:PBMC = 4:1)과 음성 대조군(Dynabead 없음)의 CD25 발현 차이를 나타내는 오버레이 그래프입니다. (B)는 각 공여자의 PBMC에서 Dynabead에 대한 반응으로 나타난 CD25 발현을 보여주는 히트 맵입니다. 공여자 2는 다른 두 공여자와 비교하여 낮은 밀도의 Dynabead에도 높은 민감도를 보였습니다. (C)는 (B)의 데이터를 농도반응곡선으로 요약한 것입니다.