실시간 세포 면역세포화학법

자동 이미징 및 분석 기술과 간편한 항체 라벨링 접근법을 결합한 Incucyte^® 실시간 세포 면역세포화학법을 사용하면 조직 배양기 내에서 단백질 표면 발현을 이미지로 측정하는 동역학적 분석이 가능합니다.  

실시간 세포 면역세포화학법은 세포 표면의 단백질 표지자를 장기적으로 추적하고 정량화하며, 이렇게 수집한 분석 데이터를 세포 기능 및 형태와 연결하여 세포 과정에 대해 폭넓은 인사이트를 얻을 수 있도록 도와줍니다.

그림 1. Incucyte^® Fabfluor-488 형광 염료의 자동 분석을 통해 세포 종류, 시간, 농도에 따른 PD-L1의 발현 파악(오른쪽) - Incucyte^® Nuclight Red MDA-MB-231(유방암) 또는 SKOV-3(난소암) 암세포를 IFNγ와 함께 배양하고, Incucyte^® Fabfluor-488-α-PD-L1 항체 복합체와 Incucyte^® Opti-Green 배경 억제제를 첨가했습니다. 녹색 형광 영역의 정량화 결과를 통해 MDA-MB-231 세포에서 IFNγ가 시간과 농도에 따른 PD-L1 발현 증가를 유도했음을 확인할 수 있습니다. 시간별 프로파일은 MDA-MB-231 세포(발현 높음)와 SKOV-3 세포(발현 중간)의 PD-L1 발현 차이를 보여줍니다.

그림 2. 세포 표면 표지자, 대식작용, 확산 측정 결과를 Multiplex 방식으로 분석하고 형태를 시각화해 분화 연구(오른쪽) - THP-1 단핵세포를 미분화 배지, 비타민 D3, 또는 PMA에 노출시키고 CD11b, CD14, 또는 CD40와 혼합한 Incucyte^® Fabfluor-488 항체를 첨가했습니다. 배지만 단독으로 사용하거나 비타민 D3로 처리한 세포와 비교해 PMA에 노출시킨 세포는 급격한 변화(HD 위상대조 이미지)를 나타냈습니다. 동역학 그래프는 다양한 처치에 대한 반응으로 나타난 시간에 따른 표면 단백질 발현의 차이를 보여줍니다. 흥미로운 점은 배지를 단독으로 사용하거나 비타민 D3에 노출시킨 경우와 달리 PMA로 처리한 세포에서는 세포 확산 감소(confluence)와 동시에 대식작용 증가가 나타났다는 것입니다. 대식작용은 Incucyte^®용 pHrodo^® Red 세포 라벨링 키트로 라벨링한 세포자멸 Jurkat 세포의 사멸세포 제거(efferocytosis) 작용으로 측정했습니다.

(동영상) 면역세포 살해 모델의 시간에 따른 세포 간 상호작용 확인 - Incucyte^® Nuclight Red A549 폐암 세포를 인간 PBMC와 함께 배양하고, Incucyte^® Fabfluor-488로 태그된 CD8 항체를 첨가했습니다. PBMC를 CD3/IL-2로 활성화하면 PBMC와 종양세포의 상호작용이 증가했습니다. 면역세포를 Incucyte^® Fabfluor-488-CD8로 라벨링한 경우 극성이 확인되었고, PBMC 중 CD8에 양성인 영역은 A549 종양세포와 접촉한 것으로 나타났습니다.

그림 5. Incucyte^® Fabfluor-488 염료 사용 시 시간에 따른 표면 표지자의 특이성 및 수명 - Ramos 세포(B세포와 유사)를 Incucyte^® Fabfluor-488로 라벨링한 여러 항체와 Incucyte^® Opti-Green과 함께 배양했습니다. 비특이적(CD45) 및 특이적(CD20) B세포 표지자에서 장기적 라벨링 효과가 관찰되었습니다. T세포 표지자(CD3)나 동형 대조군 항체에서는 형광 신호가 나타나지 않았습니다.  Ramos 및 Jurkat 세포(T세포와 유사)를 고정된 비율로 혼합한 경우, 예상과 같은 수준의 CD20 염색이 측정되어 혼합 배양액에서도 염료 사용이 가능함을 확인할 수 있었습니다.