항체 내재화란?
항원 매개 항체 내재화는 여러 항체 기반 치료제에서 중요한 역할을 합니다. 항체를 치료제로 사용해 치료 물질을 원하는 부위나 세포로 전달하여 효과를 높이고 부작용의 가능성을 줄이는 방법은 점점 더 많은 관심을 받고 있습니다. 치료용 항체는 자가면역질환, 암, 염증, 심혈관계 질환, 감염병, 그 외 수많은 장애를 비롯한 폭넓은 질병에 대한 효과적인 치료제로서 큰 중요성과 영향력을 갖고 있습니다.
연구 및 치료 현황
항체 내재화는 항체약물접합체(ADC)를 통해 특정 암세포에 유독성 약물을 전달하고, 암세포의 표면 수용체를 제거하거나 분해(즉, EGFR)하고, 면역세포 살해를 위해 종양 세포를 식별하는 항체 면역치료제를 사용(즉, ADCC 또는 ADCP)하는 등 다양한 방식으로 항체 발견과 표적 매개 내재화 분야에서 연구되고 있습니다. 항체 청소(antibody clearance) 등 항체에 대한 기능적 반응을 측정하고 최적화하는 과정도 중요합니다. 주된 항체 제거 경로 중 하나인 음세포작용이 일어나려면 항체 개발 과정에서 질적인 약동학 측정 지표에 대한 항체 최적화가 필요합니다.
각 접근법을 사용할 때에는 종양세포 식별을 위해 세포 표면을 유지하거나 ADC를 전달할 때 신속한 내재화를 유도하는 등, 여러 목적을 위해 항체가 가진 일련의 특징을 알아야 합니다. 따라서 최적의 항체 엔지니어링과 내재화 특성분석을 위해서는 후보 항체의 흡수 프로파일과 청소에 대해 이해하는 것이 중요합니다.
기존 방법의 확장 및 개선
현재 사용되는 접근법은 번거로운 항체별 라벨링, 세척 단계, 단일 시점 분석을 필요로 합니다. 때문에 과정이 불필요하게 길어지거나, 세포가 손실되거나, 단일 시점 분석의 한계로 인해 부정확한 측정이 발생할 수 있습니다. 그러므로 항체 스크리닝 및 기능 특성분석 과정 전체에 걸쳐 실시간 세포 분석을 활용해 항체 내재화를 신속하게 완벽 정량할 수 있는 저렴하고 효율적인 방법이 필요합니다.
솔루션
Incucyte® 인간, 마우스 IgG1, 또는 랫드 Fabfluor-pH Red 항체 라벨링 시약이나 Incucyte® 인간 Fabfluor-pH Orange 항체 라벨링 시약을 사용해 인간, 마우스, 랫드의 테스트 항체와 모두 호환이 가능한 싸토리우스의 새로운 솔루션을 사용하면 신속하게 높은 처리량으로 동역학적 항체 내재화 분석이 가능합니다.
적용분야
Incucyte® 항체 내재화 분석
조직 배양기 내에서 96웰 포맷으로 항체 내재화를 자동 시각화하고 정량화할 수 있는 통합 솔루션입니다.
(동영상) Incucyte® 실시간 세포분석 시스템과 Incucyte® Fabfluor-pH 항체 라벨링 시약을 사용한 동역학적 항체 내재화 모니터링
헤르셉틴은 BT-474 세포에서 12시간에 걸쳐 양성을 나타냅니다(적색 염료 측정). 음성 대조군으로는 IgG 동형이 사용되었습니다.
주요 장점
Incucyte® 항체 내재화 분석의 주요 장점
- 민감한 동역학적 형광 내재화 측정과 확인을 위한 이미지 및 동영상 기능 결합
- 신속한 1단계 라벨링 기능과 혼합 즉시 분석 가능한 프로토콜로 효율적인 항체 패널 테스트
- 뛰어난 처리량과 재현성을 가진 항체 스크리닝 데이터를 생성해 중요한 기능적 인사이트를 제공하고 항체 발견의 가능성 확대
민감한 동역학적 형광 내재화 측정과 확인을 위한 이미지 및 동영상 기능 결합
Incucyte® Fabfluor-pH 항체 라벨링 시약과 Incucyte® 실시간 세포분석 시스템이 풍부한 정보를 바탕으로 한 분석과 간편한 분석과정을 통해 새로운 인사이트를 제공합니다. 최소 1시간 안에 내재화 신호를 관찰할 수 있고, 이후 시간에 따른 내재화 속도를 비교할 수 있습니다.
알고 계셨나요?
새로운 Incucyte 통합 소프트웨어는 비교할 수 없는 사용의 편리함과 실시간 세포 이미징 및 분석 기능을 제공합니다. 상세 정보
Incucyte® Fabfluor-pH 항체 라벨링 시약과 자동 분석 툴을 사용해 시간에 따른 항체 내재화를 쉽게 시각화하고 측정할 수 있습니다.
HT1080 세포를 Incucyte® Fabfluor-pH로 라벨링한 α-CD71이나 IgG1 동형 대조군(4µg/mL)으로 처리하고, 12시간에 걸쳐 30분 간격으로 HD 위상과 적색 형광 이미지를 촬영했습니다(배율 10배). Fabfluor-α-CD71로 처리한 세포의 이미지는 세포질의 적색 형광을 보여줍니다(A). 라벨링한 동형 대조군으로 처리한 세포는 세포 형광을 나타내지 않습니다(B). 시간에 따라 자동으로 생성되는 적색 영역은 라벨링한 α-CD71로 처리한 세포가 빠르게 증가하고 있으며, 동형 대조군의 신호가 없음을 보여줍니다(C). 화면의 이미지는 처리 6시간 후 촬영했습니다. 데이터는 3개 웰의 평균 ± SEM을 나타냅니다.
여러 세포 종류에 걸쳐 세포 표면의 항원 발현에 의한 내재화 반응의 차이를 구별할 수 있습니다.
특이적인 특성을 보일 수 있도록 웰당 30K의 Jurkat 세포(T세포와 유사)와 Raji 세포(B세포와 유사)를 다양한 Incucyte® Fabfluor-pH 라벨링 항체(4µg/mL)로 처리했습니다. HD 위상과 적색 형광 이미지를 12시간에 걸쳐 30분 간격으로 촬영했습니다(배율 20배). 시간별 데이터(A & B)를 보면 두 세포주의 반응 프로파일은 테스트 표지자의 예상 발현 프로파일과 일치하고, 내재화 반응은 특이적인 항원이 발현된 경우에만 나타납니다. 특히 이 분석을 사용하면 Jukrat 세포와 다른 Raji 세포의 반응(α-CD71에 대해 내재화 속도가 빨라 비교적 가파른 반응 곡선을 보임)을 확인할 수 있습니다. 곡선 아래 영역(AUC) 분석 결과는 두 세포주의 전체적인 프로파일을 보여줍니다(C). 모든 데이터는 최소 4개 웰의 평균 ± SEM을 나타냅니다. 시간별 데이터는 정규화된 적색 영역으로 나타냈습니다.
농도에 따른 반응을 연구하고 약리학적 분석을 수행할 수 있습니다.
혼합 즉시 분석할 수 있는 간편 프로토콜을 사용해 BT-474 Her2 양성 세포를 여러 농도의 Fabfluor-pH 라벨링 헤르셉틴으로 처리합니다. 시간별 그래프를 보면 정규화된 적색 영역이 시간에 따라 헤르셉틴 농도와 함께 증가하는 것을 알 수 있습니다(A). 곡선 아래 영역에 대한 분석의 경우, EC50이 323ng/mL으로 농도에 따라 뚜렷한 반응이 나타납니다(B). 모든 데이터는 3개 웰의 평균 SEM을 나타냅니다. 시간별 데이터는 정규화된 적색 영역으로 나타냈습니다.
신속한 1단계 라벨링 기능과 혼합 즉시 분석 가능한 프로토콜로 효율적인 항체 패널 테스트
여러 테스트 항체를 빠르게 라벨링하고, 혼합 즉시 분석하는 간편 프로토콜을 통해 항체 내재화를 측정합니다. 라벨링 최적화나 세척 단계는 필요하지 않습니다. 15분 내에 항체 한 패널을 라벨링할 수 있습니다.
뛰어난 처리량과 재현성을 가진 항체 스크리닝 데이터를 생성해 중요한 기능적 인사이트를 제공하고 항체 발견의 가능성 확대
96웰 또는 384웰 포맷으로 대량의 항체를 스크리닝해 일관적인 세포 특이적 내재화 반응 데이터를 생성함으로써 테스트 항체를 완벽히 특성분석합니다.
Incucyte® Fabfluor-pH 라벨링 항체로 확실한 기능 항체 스크리닝을 수행할 수 있습니다.
서로 다른 2개의 공급업체에서 가져온 클론(클론 1a & 1b)을 포함한 6개의 CD71 항체를 HT1080 세포와 직접 테스트했습니다. Incucyte® Fabfluor-pH 항체 라벨링 시약을 사용해 1단계만으로 항체 라벨링을 끝내고 세포를 첨가한 뒤, 12시간에 걸쳐 30분 간격으로 내재화 신호를 포착했습니다(배율 10배). Incucyte로 수집한 플레이트 뷰에서 컬럼 11 & 12의 양성 및 음성 대조군 반응과 두 플레이트의 농도에 따른 항체별 반응을 뚜렷하게 볼 수 있습니다(A). 12시간 후 수집한 대조군 반응을 보면 Z 값이 0.86 및 0.77로 뚜렷한 양성 반응이 나타났습니다(B). 항체 데이터의 직접비교 분석 결과 클론에 따라 다양한 반응을 확인할 수 있었습니다(B). 모든 데이터는 3개 웰의 평균 + SEM을 나타냅니다. 대조군은 8개 웰의 평균입니다.
흔히 사용되는 분석법
| Incucyte® | 유세포분석 | 형광 현미경 분석 | |
|---|---|---|---|
| 생물학적 인사이트 | |||
| 실시간 세포 시각화 |
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| 뛰어난 민감도 |
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| 속도 측정 | |||
| 생산성 | |||
통합 분석 |
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혼합 즉시 분석하는 간편 프로토콜 |
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96웰 처리 |
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| Incucyte® Fabfluor-pH | 우수 경쟁사 제품 | 직접 라벨링 | |
|---|---|---|---|
실시간 세포 시각화 |
| ||
뛰어난 민감도 | |||
속도 측정 |
표 1.
Incucyte® 실시간 세포분석 시스템과 기존 실험방법, Incucyte® Fabfluor-pH와 기타 시약 및 직접 라벨링법을 비교한 자료. Incucyte®의 뚜렷한 장점을 확인할 수 있습니다.
주문 정보
주문 정보
제품 | Qty. | Cat. No. |
|---|---|---|
| Incucyte® 인간 Fabfluor-pH Red 항체 라벨링 시약 | 1 바이알(50 µg) | 4722 |
| Incucyte® 마우스 IgG1 Fabfluor-pH Red 항체 라벨링 시약 | 1 바이알(50 µg) | 4723 |
| Incucyte® 랫드 Fabfluor-pH Red 항체 라벨링 시약 | 1 바이알(50 µg) | 4737 |
| Incucyte® 마우스 IgG2a Fabfluor-pH Red 항체 라벨링 시약 | 1 바이알(50 µg) | 4750 |
| Incucyte® 마우스 IgG2b Fabfluor-pH Red 항체 라벨링 시약 | 1 바이알(50 µg) | 4751 |
Incucyte® 인간 Fabfluor-pH Orange 항체 라벨링 시약 | 1 바이알(50 µg) | 4812 |
