고처리량 고성능 유세포분석을 사용한 자연살해세포 활동 분석
자연살해(NK) 세포는 선천적인 면역체계의 핵심적인 요소로, 면역 감시와 항암 반응에서 중요한 역할을 합니다. 현재 암 치료용으로 여러 종류의 NK 세포 관련 면역치료제가 개발되고 있습니다. mAb, BiKES, TRiKES처럼 NK 세포 매개 항체의존 세포독성(ADCC)을 유도할 수 있는 종양 특이적 항체는 다양한 종류의 암에 효과적인 것으로 입증되었습니다. CAR-NK 세포 생산 기술이 발달하면 보다 더 특이적으로 종양세포를 제거할 수 있을 것입니다. 새로운 NK 세포 매개 치료제를 평가할 때에는 NK 세포 활성도를 정량화해 잠재적인 치료 효과를 파악할 수 있어야 합니다. 기존의 NK 매개 살해 및 활성도 측정 기술에는 흔히 다음과 같은 단점이 있습니다.
- 크롬방출분석법 등, 노동력이 많이 필요한 간접적 세포독성 측정법을 사용합니다.
- 세포독성, 활성화 상태, 사이토카인/단백질 분비를 동시에 정량하지 못합니다.
- 여러 공정을 사용해야 하고, 공정별로 다른 장비가 필요합니다.
- 생리학적으로 관련성 높은 환경 조건을 조성하지 못합니다.
iQue® 자연살해세포 살해 솔루션은 iQue® 인간 NK 세포 살해 키트를 사용해 높은 처리량으로 타깃 세포 살해와 NK 세포 표현형 및 활성화 표지자 발현을 동시 분석하고, 분비된 작동 단백질 및 사이토카인을 정량화합니다. iQue® 고성능 고처리량 유세포분석과 iQue® Forecyt 통합 소프트웨어 분석, 표현형 및 기능 분석 기능을 하나로 결합해 면역항암제 및 NK 세포 매개 세포치료제 개발을 위한 간편 솔루션을 제공합니다.
적용분야
분석 개요
이제 하나의 웰로 표현형과 기능을 측정해 생산성을 높이고 NK 세포 살해에 대해 중요한 인사이트를 확보할 수 있습니다.
- NK 세포 활성화 상태와 타깃 세포 살해를 단일 웰 Multiplex 방식으로 측정할 수 있는 접근법을 알아보십시오.
그림 1. iQue® 인간 NK 세포 살해 키트 분석 원리 타깃 세포를 작동세포와 식별할 수 있도록 형광 라벨링 염료로 염색하고, 형광 세포막 완전성 염료를 사용해 종양세포 살해를 측정합니다. NK 세포는 CD3, CD56, CD16을 사용해 식별합니다. 세포 활성화 상태는 CD69와 CD25을 사용해 평가합니다. 동일한 웰에서 샌드위치 면역분석 포맷으로 2-plex iQue Qbeads®를 사용해 전염증성 사이토카인, 인터페론 감마(IFNg)와 세포사멸을 촉진하는 세린 단백질 분해효소, 그랜자임 B의 생성을 측정합니다. 기타 사이토카인은 인간 NK 세포 컴패니언 키트를 사용해 분석할 수 있습니다.
주요 장점
생물학적 인사이트 확보
생리학적으로 관련성 있는 모델로 NK 세포 매개 종양세포 살해를 연구할 수 있습니다.
그림 2. 혼합배양 분석으로 자연살해세포 매개 항체의존 세포독성, 사이토카인/단백질 분비, 표지자 발현 정량화. 라벨링된 Raji 종양세포(20K/웰)를 2명의 공여자로부터 채취한 PBMC(200K/웰)와 혼합배양했습니다. PBMC는 3종의 항CD20 항체, Ab-1(IgG1), Ab-2(IgG1), 음성 대조군 Ab-3(IgA2) 중 하나와 함께 배양했습니다. 농도는 10ug/mL ~ 0.128ng/mL이었습니다.
4시간 후, 인간 NK 세포 살해 키트와 iQue® 3을 사용해 10µL의 샘플로 종양세포 살해를 분석하고, iQue® 인간 NK 세포 컴패니언 키트로 그랜자임 A를 측정했습니다.
(A,B) 2명의 공여자에게서 채취한 타깃 세포 살해에서 항체에 대해 다른 반응이 나타났습니다. (C,D) 그랜자임 A 생성은 농도와 공여자에 따라 달랐습니다. (E,F) 자연살해세포의 CD16 양성 발현은 자극이 증가하면 감소했습니다.
그림 3. 사이토카인 자극을 사용한 종양세포의 직접 NK 매개 살해 정량화. 라벨링한 K562 종양세포(20K/웰)를 일반 배지(비활성화 NK 세포)에서, 또는 200U/mL의 IL-2 및 100ng/mL의 IL-15를 포함한 배지(활성화 NK 세포)에서 16~18시간 동안 배양하여 농축한 인간 NK 세포(음성 선별)와 혼합배양했습니다(작동세포:타깃세포 = 1:1 또는 5:1). 각각 4시간 및 24시간 후, iQue® 인간 NK 세포 살해 키트와 iQue® 3을 사용해 10µL의 샘플로 종양세포 살해를 분석했습니다.
(A) 4시간 동안 비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 혼합배양한 후 타깃 세포의 생존성을 나타낸 히스토그램입니다.(B,C) 종양세포를 비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 4시간(B) 또는 24시간(C) 동안 혼합배양한 후 타깃 세포의 세포사 비율입니다.
생산성 최대화
혼합된 세포와 비드 분석 포맷을 사용해 작동세포 표지자 발현과 분비된 작동 단백질을 동시 측정합니다.
그림 4. 표현형 식별 및 사이토카인 분비 분석을 사용해 다양한 NK 활성화 상태 검출. 라벨링한 K562 종양세포(20K/웰)를 일반 배지(비활성화 NK 세포)에서, 또는 200U/mL의 IL-2 및 100ng/mL의 IL-15를 포함한 배지(활성화 NK 세포)에서 16~18시간 동안 배양하여 농축한 인간 NK 세포(음성 선별)와 혼합배양했습니다(작동세포:타깃세포 = 5:1). 24시간 후, 10µL의 샘플을 채취한 뒤 iQue® 인간 NK 세포 살해 키트와 iQue® 3을 사용해 분석했습니다.
(A) 활성화 표지자(CD69 및 CD25) 발현을 나타냅니다. (B) IFNg 생성과 그랜자임 B 분비를 나타냅니다. (C) iQue® 인간 NK 세포 컴패니언 키트와 iQue® 인간 NK 세포 살해 키트를 함께 사용해 기타 사이토카인을 동시 분석했습니다. NK = 자연살해세포. T = 타깃 K562 종양세포.
IL-2 및 IL-15에 의한 활성화로 인해 그랜자임 B, CCL5(RANTES)와 같은 다수의 작동 단백질 분비와 활성화 표지자 발현이 증가했습니다. NK 세포를 타깃 세포와 함께 배양하면 효과가 커졌습니다.
데이터 확보 간소화
실시간 데이터 분석 및 새로운 시각화 도구로 데이터를 신속하게 확보합니다.
그림 5. iQue Forecyt®의 사전 정의된 게이트와 다양한 분석 기능을 사용한 인간 NK 세포 자동 표현형 분석.
(A) 양성 및 음성 웰을 사용해 비활성화 NK 세포(음성, 적색)와 사이토카인 활성화 NK 세포(양성, 녹색)의 CD96 발현 그래프를 작성한 예시입니다. (B) 웰당 CD69 양성인 세포의 백분율을 나타낸 플레이트 히트 맵입니다. (C) NK 세포의 CD69 발현을 나타낸 오버레이 히스토그램입니다. (Non-act. NK = 비활성화 NK 세포, Act. NK = 사이토카인 활성화 NK 세포, T = 타깃 종양 세포).
시간 및 샘플 절약
기존 분석과정을 줄이고 간소화해 최소한의 샘플 조작만으로 수행할 수 있는 간단한 Multiplex 분석법을 개발했습니다.
그림 6. iQue® 인간 NK 세포 살해 키트를 사용해 NK 세포를 매개로 한 종양세포 살해를 쉽게 분석하고, NK 세포 활성화 상태와 사이토카인 분비를 평가
주문 정보
iQue® 인간 NK 세포 살해 키트
플랫폼 | iQue® 3/iQue® Screener VBR Configuration과 호환. |
|---|---|
크기 | 카탈로그 번호 |
1 x 96웰 | 97082 |
5 x 96웰 | 97083 |
1 x 384웰 | 97084 |
5 x 384웰 | 97085 |
iQue® 인간 NK 세포 컴패니언 키트
카탈로그 번호 | 설명 |
|---|---|
97089 | iQue® 인간 MIP 1α NK 세포 컴패니언 키트 |
97090 | iQue® 인간 RANTES NK 세포 컴패니언 키트 |
97091 | iQue® 인간 GM-CSF NK 세포 컴패니언 키트 |
97092 | iQue® 인간 CD178/Fas 리간드 NK 세포 컴패니언 키트 |
97093 | iQue® 인간 그랜자임 A NK 세포 컴패니언 키트 |
97094 | iQue® 인간 TNFα NK 세포 컴패니언 키트 |
