제품 개요
실시간 호중구 세포외 덫 정량화
감염 부위에서 일차적인 방어를 담당하는 호중구는 호중구 세포외 덫(NET)을 분비하는 등 다양한 전략으로 미생물을 분해하고 파괴하여 면역체계에서 필수적인 역할을 합니다. NET는 항균 단백질과 DNA로 구성된 거미줄 형태의 구조로, NETosis 세포사멸이라고도 하는 호중구의 세포예정사 과정에서 분비됩니다. 숙주를 보호하는 NET는 병원체를 사로잡아 분해하지만, 류마티스성 관절염과 같은 다양한 자가면역 질환과 병리적 조건에서도 발생하는 것으로 알려져 있습니다.
싸토리우스의 전략
Incucyte® 실시간 세포 이미징 시스템과 Incucyte® Cytotox Green 시약을 사용하면 NETosis 세포사멸을 겪고 있는 호중구를 실시간으로 자동 정량화할 수 있습니다. Incucyte® 생세포 시약과 분석 기술은 핵의 팽창과 탈응축, NET 분비에 이르는 NETosis 세포사멸의 각 단계를 관찰하고 측정할 수 있습니다.
NETosis 세포사멸 분석
Incucyte® NETosis 세포사멸 분석 개요
조직 배양기 내에서 96웰 포맷으로 Netosis 세포사멸을 자동 시각화하고 정량화할 수 있는 통합 솔루션입니다.
IncuCyte® 실시간 세포 NETosis 분석법으로 NETosis 세포사멸 측정하기 - PMA로 처리한 인간 호중구의 NETosis 세포사멸을 실시간으로 측정합니다(왼쪽). NETosis 세포사멸 중인 호중구를 혼합 즉시 분석할 수 있는 IncuCyte Cytotox Green 시약을 사용해 녹색으로 라벨링한 뒤 IncuCyte 실시간 세포분석 시스템으로 실시간 정량화합니다.
주요 장점
- 타임랩스 이미징을 사용한 NETosis 검증 - Incucyte® 실시간 세포분석 기술을 사용하면 다엽화된 핵의 소실, 핵 탈응축, 세포막 해체를 실시간으로 추적하여 NETosis 세포사멸과 관련된 형태 변화를 검증할 수 있습니다.
- IncuCyte Cytotox Green으로 분석 기간 전체에 걸친 자동 분석 수행 - 세포를 안정적인 배양기에서 꺼내지 않고 처치 효과의 발생 현황과 시기를 파악할 수 있어 민감한 세포에 적합합니다.
- 혼합 즉시 분석하는 96웰 간편 프로토콜로 용이한 약물 스크리닝 - 세척, 고정, 리프팅 과정 없이 혼합 즉시 분석하는 Incucyte Cytotox Green 시약을 사용해 세포 외 DNA 분비와 형광 강화 과정에서 NETosis 세포사멸을 빠르게 시각화하고 정량화합니다.
- 세포자멸사까지 파악하는 Multiplex 분석으로 기전에 대한 인사이트 확대 - Incucyte® Annexin V Red 시약을 Cytotox Green 시약과 함께 사용하면 Multiplex 측정으로 세포자멸사와 NETosis 세포사멸을 쉽게 구별할 수 있습니다.
타임랩스 이미징을 사용한 NETosis 검증
Incucyte® 실시간 세포분석 기술을 사용하면 다엽화된 핵의 소실, 핵 탈응축, 세포막 해체를 실시간으로 추적하여 NETosis 세포사멸과 관련된 형태 변화를 검증할 수 있습니다.
IncuCyte HD 이미지를 사용한 NETosis 검증 - DMSO(1.25% v/v)와 ATRA(0.1µM)의 IncuCyte 이미지를 통해 IncuCyte Cytotox Green 시약과 함께 PMA로 자극한 HL-60 세포를 구별할 수 있습니다. 자극 후 2시간 안에 나타나는 특징적인 핵 탈응축을 뚜렷하게 확인할 수 있습니다. 세포질이 핵질과 혼합되면서 위상 이미지로는 핵을 볼 수 없게 됩니다. 핵 내용물은 형질막으로 이동하여 분비되고, 외부 DNA는 IncuCyte Cytotox Green 시약과 결합하며, 형광 강화(녹색)가 관찰됩니다.
IncuCyte Cytotox Green으로 분석 기간 전체에 걸친 자동 분석 수행
세포를 안정적인 배양기에서 꺼내지 않고 처치 효과의 발생 현황과 시기를 파악할 수 있어 민감한 세포에 적합합니다.
비침습적 방식을 사용해 자동으로 처치 효과 정량화 - IncuCyte NETosis 분석을 사용하면 96웰 플레이트의 모든 웰을 자동으로 이미징하고 분석(형광 이미지)하여 시간에 따른 호중구의 생리학적 특성을 동역학적으로 파악할 수 있습니다(왼쪽 그래프). 통합 Incucyte® 기본 분석 소프트웨어와 영역 필터(오른쪽 그래프, 300µm2 미만의 오브젝트 제외)를 함께 사용하면 세포자멸사(CMP 처리, 작은 라벨링 세포, 생존성을 잃은 핵만 형광을 나타냄)를 유도하는 처치와 NETosis 세포사멸(PMA 처리, 핵 내용물이 형질막으로 이동 후 분비, 외부 DNA 라벨링됨)을 유도하는 처치를 구별할 수 있습니다.
세척, 고정, 리프팅 과정 없이 혼합 즉시 분석하는 96웰 간편 프로토콜로 용이한 약물 스크리닝
혼합 즉시 분석하는 Incucyte Cytotox Green 시약을 사용해 세포 외 DNA 분비와 형광 강화 과정에서 NETosis 세포사멸을 빠르게 시각화하고 정량화합니다.
IncuCyte® Cytotox Green으로 분석 기간 전체에 걸친 자동 분석 수행
농도에 따른 반응 연구 및 약리학적 분석 수행 - dHL-60 세포를 서로 다른 농도의 NADPH 산화효소 억제제, 다이페닐렌아이오도늄(DPI)으로 처리했습니다. 그 다음, PMA로 세포를 자극하고 혼합 즉시 분석하는 간편 프로토콜을 사용해 Incucyte Cytotox green으로 라벨링했습니다. 시간별 그래프를 보면 100nM의 PMA만 사용한 경우 총 녹색 오브젝트 영역이 시간에 따라 증가하지만, DPI 농도가 증가할수록 증가세가 억제된다는 점을 확인할 수 있습니다(A). IncuCyte로 촬영한 플레이트 뷰는 양성 및 음성 대조군 반응(H행)과 농도에 따른 각 억제제별 반응을 보여줍니다(억제제 및 농도당 n=3)(B). 곡선 아래 영역에 대한 분석을 수행하면 농도에 따른 뚜렷한 반응을 보일 수 있습니다(C).
세포자멸사까지 파악하는 Multiplex 분석으로 기전에 대한 인사이트 확대
Incucyte® Annexin V Red 시약을 Incucyte Cytotox Green 시약과 함께 사용하면 Multiplex 측정으로 세포자멸사와 NETosis 세포사멸을 쉽게 구별할 수 있습니다.
NETosis와 PS 외부화를 결합한 Multiplex 분석 Incucyte Cytotox Green 시약(NETosis – 밝은 형광, 큰 오브젝트 영역)이나 Incucyte Annexin V Red(PS 외부화 – 어두운 형광)로 라벨링한 이오노마이신 또는 PMA로 세포를 자극해 서로 다른 호중구 세포사를 검출했습니다.
주문 정보
Incucyte Cytotox Green 및 Annexin V Red 시약은 Incucyte 실시간 세포분석 시스템과의 사용에 대해 완전한 검증을 거쳤습니다. 두 시약을 결합해 같은 웰에서 NETosis 세포사멸과 세포자멸사를 Multiplex 방식으로 측정할 수 있습니다.
제품 | Qty. | Cat. No. |
|---|---|---|
| 사멸세포 계수용 Incucyte® Cytotox Green 시약 | 5 uL x 5 | 4633 |
| 세포자멸사용 Incucyte® Annexin V Red 시약 | 100 테스트 | 4641 |
기술 관련자료
고처리량 실시간 이미징 기법으로 NETosis 세포사멸을 정량화하고 인간 호중구의 세포사 기전 식별하기
A High Throughput Real-Time Imaging Technique to Quantify NETosis and Distinguish Mechanisms of Cell Death in Human Neutrophils(고처리량 실시간 이미징 기법으로 NETosis 세포사멸을 정량화하고 인간 호중구의 세포사 기전 식별하기). Gupta S, Chan DW, Zaal KJ, Kaplan MJ. J Immunol, 200: 869-879, 2017
“Incucyte 플랫폼은 재현성 높고 신속한 자동 분석 기능으로 NETosis 세포사멸을 정량화할 수 있어 호중구 연구를 확실하게 최적화해주는 새로운 실시간 분석 기술이다. 이 플랫폼은 호중구의 생리학적 특성과 NETosis 세포사멸을 평가하고, 새로운 호중구 표적을 신속하게 개발하고 테스트할 수 있는 강력한 도구다.”