미토콘드리아 막 전위 분석

Incucyte^® 미토콘드리아 막 전위 분석

전자 이동 사슬을 통해 ATP를 합성할 때 필요한 수소 이온의 전기화학적 전위를 유지하는 데 반드시 필요한 미토콘드리아 막 전위(MMP 또는 ΔΨm)는 미토콘드리아 건강에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있습니다. 정상적인 생리학적 작용 하에서 MMP는 비교적 안정적입니다. 그러나 장기적인 교란은 세포 건강과 생존성에 악영향을 미쳐 다양한 병리생리학적 결과로 이어질 수 있습니다. MMP를 모니터링하면 미토콘드리아 완전성 변화를 높은 민감도로 조기에 식별할 수 있고, 당뇨병이나 암, 신경변성과 같은 병리학적 질병과 관련된 미토콘드리아 기능이상을 파악할 수 있습니다.

일반적인 MMP 분석법은 간접적인 연결 엔드포인트 측정 방식에 의존하며, 형태의 변화를 통해 쉽게 검증할 수 없습니다. Incucyte^® 미토콘드리아 막 전위 분석법은 일시적이거나 장기적인 생세포의 MMP 변화를 실시간으로 검출할 수 있도록 도와주며, 세포 라벨링 시약이나 세포자멸사 시약, 세포독성 시약과 함께 사용하는 경우 다른 세포 건강 지표까지 Multiplex 방식으로 측정할 수 있습니다. MMP 변화를 연속 추적하여 세포 항상성의 복잡성과 관련 질병을 이해해 보시기 바랍니다.

적용분야

Incucyte^® 미토콘드리아 막 전위 분석 소개

통합 솔루션을 사용해 세포 배양기 내에서 MMP 변화를 자동으로 실시간 정량화하고 시각화합니다. TMRE나 TMRM 분석과 마찬가지로 세포 투과성인 Incucyte^® MMP Orange 시약은 미토콘드리아 막의 전기화학적 기울기에 의해 생성되는 ΔΨm에 비례하여 활성 미토콘드리아 내에 축적됩니다. MMP 하락은 미토콘드리아의 기능이나 완전성 이상을 가리키며, 세포자멸사의 초기 지표로도 활용할 수 있습니다.

이 분석 키트에서는 2가지 대조군 화합물을 사용합니다. 첫 번째, FCCP는 H+ 이온을 미토콘드리아 막 너머로 이동시키는 짝풀림제로 탈분극을 유도합니다(형광 감소로 확인 가능). 두 번째, 올리고마이신 A는 ATP 합성효소 억제제로 과다분극을 유발합니다(형광염료 증가로 확인 가능).

주요 장점

미토콘드리아 스트레스 평가 - 혼합 즉시 분석하는 간편 프로토콜을 통해 미토콘드리아 스트레스를 동역학적으로 측정합니다.
생세포의 MMP 변화 측정 - 세포 배양기 내에서 생세포의 MMP를 높은 재현성으로 자동 정량화합니다.
형태 변화 모니터링 및 세포 건강 시약을 사용한 Multiplex 분석 - 시간에 따른 형태학적 변화와 세포자멸사 또는 세포독성 분석 결과를 동시에 시각화하여 대사 변화와 관련된 세포 건강의 변화를 분석할 수 있습니다.

미토콘드리아 스트레스 평가

Incucyte^® MMP Orange 시약 키트를 사용해 혼합 즉시 분석하는 간편 프로토콜로 MMP 변화를 신속하게 시각화 및 정량화합니다.

생세포의 MMP 변화 측정

생세포의 MMP를 높은 재현성으로 자동 정량화합니다. 시간에 따른 형광 강도를 측정해 MMP 변화를 정량화해 보세요.

그림 1. 미토콘드리아 막 전위의 동역학적 모니터링 - HeLa 세포를 매개체, 캄프토테신, FCCP, 또는 올리고마이신으로 처리하고, Incucyte^® MMP Orange 염료를 첨가해 화합물이 미토콘드리아 막 전위에 미치는 시간에 따른 영향을 모니터링했습니다(A). 대조군과 약물로 처리한 웰의 평균 형광 강도를 나타낸 0~40시간 후 히스토그램을 보면 화합물에 의해 유도된 미토콘드리아의 극성 변화를 확인할 수 있습니다(B). 무표지 세포 계수는 Incucyte^® 세포별 분석 소프트웨어로 수행했습니다(C). HD 위상/형광 이미지는 6시간 이후(매개체, FCCP, 올리고마이신) 또는 40시간 이후(캄프토테신) 획득했습니다(D).

형태 변화 모니터링 및 세포 건강 시약을 사용한 Multiplex 분석

Incucyte^® MMP Orange 시약 키트를 Incucyte^® 카스파제 3/7, 아넥신 V, Cytotox 염료와 함께 사용하면 세포자멸사와 세포독성은 물론, 시간에 따른 형태 변화까지 Multiplex 방식으로 분석할 수 있습니다.

그림 2. 미토콘드리아 막 전위와 세포 건강 지표의 Multiplex 분석 - HeLa 세포를 단백질 키나아제 억제제, 스타우로스포린(SSP)으로 처리하고, Incucyte^® MMP Orange 및 Cytotox NIR 염료를 첨가해 화합물이 미토콘드리아 막 전위와 세포독성에 미치는 영향을 동시에 모니터링했습니다(A). MMP와 Cytotox NIR 분석에 대한 농도반응곡선을 모두 확인할 수 있습니다(24시간 후 데이터, B). 이미지는 대조군, 0.3µM SSP, 3µM SSP로 처리한 웰의 대표 HD 위상 + 형광 이미지입니다(24시간 후 데이터, C).