대식작용이란?

대식작용은 세포가 고형 물질을 사로잡아 내재화화는 세포내섭취 현상을 말합니다. 면역체계에서 특히 대식작용을 수행하는 세포로는 대식세포, 호중구, 미성숙한 가지세포가 있습니다. 대식작용은 미생물을 사로잡아 파괴하고 처리한 뒤 항원을 제시하는 주된 과정으로, 병원체에 대한 면역 반응에서 중요한 역할을 수행합니다.
 

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적용분야

Incucyte® 대식작용 분석 개요

혼합 즉시 분석하는 간편 이미징 분석으로 배양기 내에서 시간에 따른 생세포의 대식작용을 자동 정량화합니다. pH에 민감한 접합 프로브를 사용해 생물입자의 내재화를 시각화 및 분석할 수 있으며, 박테리아 그람 양성균이나 음성균, 또는 효모균 유래 병원체에 대한 면역세포의 대식작용을 모니터링하는 데 적합합니다.


동영상: Incucyte® 실시간 세포분석 시스템을 통한 실시간 대식작용 모니터링 - Incucyte® 실시간 세포 이미징 및 분석법으로 촬영한 타임랩스 동영상을 통해 마우스 대식세포 J774A.1의 Incucyte®용 pHrodo® Green E. coli Bioparticles® 탐식 과정에 대한 실시간 시각화 결과를 볼 수 있습니다. pHrodo® Bioparticles®이 대식작용에 의해 탐식되고, 파고솜의 산성 환경에 진입하는 순간 형광이 증가합니다. Incucyte® 통합 이미지 분석 툴을 사용하면 분석 과정 전체에 걸친 녹색 형광 신호를 검출 및 측정하는 동시에 배경 형광의 영향을 최소화할 수 있습니다. 특히, 식세포 컵 형성을 통해 시간에 따른 대식세포의 동적인 작용과 생물입자 탐식을 볼 수 있습니다.

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분석 개요

  • 대식세포(J774A.1 마우스 대식세포) 또는 다른 종류의 식세포를 96웰 또는 384웰 마이크로 역가 플레이트에 시딩합니다.
  • 혼합 즉시 분석하는 Incucyte®용 간편 무균 pHrodo® Bioparticles®를 첨가해 실시간으로 대식작용을 측정합니다.
  • pHrodo® Bioparticles®가 파고솜에 내재화되면서 세포 형광이 증가합니다. Incucyte® 자동 이미지 분석 기능으로 시간에 따른 대식작용을 정량화할 수 있습니다.

주요 장점

타임랩스 이미징을 사용한 대식작용 검증

그림 1. J774A.1 마우스 대식세포에 의한 Incucyte®용 pHrodo® Green E. coli Bioparticles®의 4시간에 걸친 대식작용을 보여주는 타임랩스 시각화 데이터 - 이미지를 통해 라벨링된 형광 반점(파고솜) 구조가 세포기질에는 존재하지만 핵에는 없음을 알 수 있습니다.

자동 분석 및 정량화

그림 2. 형광 분리를 이용한 대식작용 정량화 - Incucyte® 소프트웨어를 사용해 형광 이미지를 정확하게 분리하고(분홍색 마스킹), 배경 형광의 영향을 최소화할 수 있습니다.

세척, 냉각, 리프팅 과정 없이 혼합 즉시 분석하는 96/384웰 간편 포맷

그림 3. Incucyte® 대식작용 분석 퀵 스타트 가이드

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높은 측정 민감도, 낮은 배경, 적은 세포 필요량

반응의 규모는 세포 수와 Bioparticle®의 수에 따라 달라집니다.

그림 4. 세포와 Bioparticle®의 수에 따라 달라지는 대식작용의 정량 결과 - J774A.1 마우스 대식세포에 의한 Incucyte®용 pHrodo® Green S. aureus Bioparticles®의 대식작용(96웰 포맷)을 분석했습니다. 웰당 3천 개의 적은 세포로도 높은 신호 : 배경 비를 얻을 수 있습니다.

그림 5. 세포, Bioparticles®, 또는 억제제(사이토칼라신 D)가 없는 경우에도 배경 신호가 적거나 전혀 없고 일관적인 대식작용 신호 - J774A.1 세포에 의한 Incucyte®용 pHrodo® Green E. coli Bioparticles®의 대식작용을 나타낸 플레이트 뷰.

그림 6. 사이토칼라신 D, 라트룬쿨린 A, 노코다졸에 의한 대식작용 억제 - 억제제를 함께 사용했을 때 J774A.1 쥐과 대식세포에 의한 Incucyte®용 pHrodo® Green E. coli Bioparticles®의 대식작용.

Incucyte® 대식작용 분석법 vs. 흔히 사용되는 기존 방식

대식작용 분석에 흔히 사용되는 기존 방식은 단일 포인트를 사용하거나(예: 하이 컨텐트 분석(HCA)), 세포를 리프팅해야 하거나(예: 유세포분석), 라벨링한 병원체의 세척/냉각이 필요한 경우가 많습니다(예: 형광표지법).

Incucyte® 실시간 세포분석    

플레이트 리더    

유세포분석    

HCA

ELISA

실시간 세포 시각화    

 

통합 분석    

 

 

 

혼합 즉시 분석, 세척이나 냉각 불필요    

 

장기적인 동역학 측정    

 

유연한 작동세포 선택    

 

 

 

 

 

고정/리프팅 불필요    

 

 

뛰어난 민감도/낮은 배경    

 

 

 

적은 세포/생물입자 필요량    

 

 

 


주문 정보

주문 정보

Incucyte®용 pHrodo® Bioparticles®은 Incucyte® 실시간 세포분석 시스템과의 사용에 대해 완전한 검증을 거쳤으며, 장시간(0~48시간 이상)의 대식작용 측정을 위해 멸균되어 제공됩니다.


제품

Qty.

Cat. No.

Incucyte®용 pHrodo® Red E. coli Bioparticles®

2 mg

4615

Incucyte®용 pHrodo® Green E. coli Bioparticles®

2 mg

4616

Incucyte®용 pHrodo® Red Zymosan Bioparticles®

1 mg

4617

Incucyte®용 pHrodo® Green Zymosan Bioparticles®

1 mg

4618

Incucyte®용 pHrodo® Red S. aureus Bioparticles®

2 mg

4619

Incucyte®용 pHrodo® Green S. aureus Bioparticles®

2 mg

4620


관련자료

문헌 및 문서

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