세포 대식작용 & 사멸세포 제거
약하거나 죽어가는 세포에 대한 대식작용은 대식세포와 같은 면역 식세포의 주요 기능 중 하나입니다. 사멸한 세포나 세포자멸사 중인 세포를 대식작용으로 청소하는 과정을 사멸세포 제거(efferocytosis)라고 합니다. 사멸세포 제거는 염증 삽화를 해결(예: 염증 후 남아 있는 호중구 제거)하고, 만성 염증이나 자가면역 질환(예: COPD, 천식, 류마티스성 관절염, 섬유증, 죽상경화증)의 발생을 예방하는 데 중요합니다. 또한, 사멸세포 제거는 항암제 처치 후 세포자멸사 중인 종양세포를 효율적으로 제거하여 세포 내용물이 원치 않는 염증 반응을 유발하지 않도록 방지하는 데에도 중요한 역할을 합니다.
암세포가 사멸해야만 식세포에 의해 제거될 수 있는 것은 아닙니다. 식세포의 작용을 유도하는 물질로 종양세포를 라벨링하면 종양세포를 표적화해 식세포의 흡수와 제거를 촉진할 수 있습니다. 리툭시맙(B세포를 표적으로 하는 항CD20 단일클론항체)과 같은 항체를 첨가하면 항체의존 세포매개 대식작용(ADCP)을 유도할 수 있습니다. 비슷한 전략으로는 종양세포가 청소를 피하기 위해 발산하는 포식 방지 신호(CD47 등)를 차단하는 항체를 사용하는 것이 있습니다. 항CD47 항체는 이 신호를 차단해 식세포가 종양세포를 인지하고 제거할 수 있도록 도와줍니다.
적용분야
Incucyte® 세포 대식작용 분석 개요
Incucyte® 실시간 세포분석 시스템을 사용하면 세포 배양기 내에서 대식작용과 사멸세포 제거를 실시간으로 자동 분석할 수 있습니다.
분석 기간 전체에 걸쳐 대식작용을 자동으로 분석하고, 원하는 타깃 세포를 검증된 pH 민감성 프로브(Incucyte® pHrodo® Red 대식작용 세포 라벨링)로 라벨링해 세포 내재화를 실시간 측정해 보세요. 또한, Incucyte®의 고해상도 위상대조 이미지로 대식작용 신호를 확인해 세포 탐식을 직접 시각화할 수 있습니다.
권장 용도
- 사멸세포 제거 억제/활성화를 위한 화합물 스크리닝
- 항체 매개 세포 대식작용 정량화(예: 항CD47 항체 매개 대식작용/ADCP)
동영상 - Incucyte® 실시간 세포분석 시스템을 통한 실시간 세포자멸사 세포 대식작용 모니터링 - Incucyte® 시스템으로 촬영한 타임랩스 동영상을 통해 Incucyte® pHrodo® Red로 라벨링한 세포자멸 Jurkat T 림프구의 마우스 대식세포 J774A.1에 의한 탐식 과정을 실시간으로 시각화한 데이터를 확인해 보시기 바랍니다. 세포자멸 Jurkat 세포가 대식작용에 의해 탐식되고, 파고솜의 산성 환경에 진입하는 순간 형광이 증가합니다. Incucyte® 통합 이미지 분석 툴을 사용하면 분석 과정 전체에 걸친 적색 형광 신호를 검출 및 측정할 수 있습니다.
분석 개요
대식세포(J774A.1 마우스 대식세포) 또는 다른 종류의 식세포를 96웰 또는 384웰 마이크로 역가 플레이트에 시딩합니다.
타깃 세포자멸 세포(예: 호중구, Jurkat 세포 등)를 Incucyte® pHrodo® Red 대식작용 세포 라벨링 키트로 라벨링한 뒤 첨가하고, 실시간으로 식세포에 의한 타깃 세포의 흡수를 측정합니다.
타깃 세포가 파고솜에 내재화되면서 세포 형광이 증가합니다. Incucyte® 자동 이미지 분석 기능으로 시간에 따른 세포 대식작용을 정량화할 수 있습니다.
주요 장점
주요 장점
- 타임랩스 이미징을 사용한 세포 대식작용 시각화 및 정량화
- 분석 기간 전체에 걸친 자동 분석 수행
- 세척, 고정, 리프팅 과정 없이 혼합 즉시 분석하는 96/384웰 간편 프로토콜
- 유연한 분석 포맷으로 관련성 높은 측정
- 원하는 식세포/타깃 세포와 호환되는 Incucyte® pHrodo® Red 세포 라벨링 키트
타임랩스 이미징을 사용한 대식작용 시각화 및 정량화
- 직관적인 Incucyte® 이미지 분석 툴을 사용해 실시간으로 대식작용을 관찰하고 측정할 수 있습니다. 이미지와 동영상으로 처치 효과를 검증하세요.
- pHrodo 형광 신호는 타깃 세포가 내재화되었을 때에만 발생하므로 인공물 신호의 위험이 없습니다.
그림 1. 이미지와 동영상으로 세포 대식작용(사멸세포 제거)을 시각화 및 검증 - Incucyte® pHrodo® Red 세포 라벨링 키트로 라벨링한 세포자멸 Jurkat 세포의 J774A.1 마우스 대식세포에 의한 대식작용을 24시간에 걸쳐 보여주는 타임랩스 이미지입니다. 형광 신호와 대식작용 관련 표현형 변화의 상관관계를 확인할 수 있습니다. Incucyte® 이미지 분석 툴을 사용해 사멸세포 제거 과정을 정량화할 수 있고, 사용자 친화적인 소프트웨어를 통해 이미지를 바탕으로 탐식된 세포자멸 세포(청색 마스킹)를 직접 검출할 수 있습니다.
분석 기간 전체에 걸친 자동 분석 수행
세포를 안정적인 배양기에서 꺼내지 않고 처치 효과의 발생 현황과 시기를 파악할 수 있습니다.
그림 2. 비침습적 방식을 사용해 자동으로 처치 효과 정량화 - 96/384웰 플레이트의 모든 웰을 자동으로 이미징하고 분석해 시간에 따른 마이크로플레이트 사멸세포 제거 분석 결과를 보여줍니다(왼쪽). 또한, 시간별 데이터를 통해 농도에 따른 처치 효과를 확인하고(중앙) 데이터를 농도반응곡선으로 변환해 약리학적 특성을 비교할 수 있습니다(오른쪽).
세척, 고정, 리프팅 과정 없는 96/384웰 간편 프로토콜
그림 3. 퀵 가이드 - 1) 식세포(예: J774A.1, 1-10K/웰)를 96웰 플레이트에 시딩하고 밤새 배양합니다(50µL/웰). 2) 대식작용에 앞서 작동세포를 화합물로 처리합니다(전처리 30분~24시간, 25µL/웰). 3) 처리한 웰에 Incucyte pHrodo로 라벨링한 타깃 세포를 첨가합니다(10µL/웰, 25µL/웰). 4) Incucyte 시스템으로 2~18시간에 걸쳐 10~20분 간격으로 이미지(배율 10배 또는 20배)를 촬영합니다. 통합 소프트웨어로 분석을 수행합니다.
유연한 분석 포맷으로 관련성 높은 측정
- 원하는 대식세포와 타깃 세포로 약한 세포, 사멸한 세포, 사멸 중인 세포의 대식작용을 측정할 수 있습니다. 항체 매개 세포 대식작용(예: 항CD47 항체 매개 대식작용/ADCP)이나 사멸세포 제거(세포자멸 세포의 대식작용)를 연구해 보시기 바랍니다.
그림 2. 유연한 타깃 세포 및 작동세포 선택 - 생존성 있는 T 림프모세포 CCRF-CEM을 Incucyte® pHrodo® Red 세포 라벨링 키트로 라벨링한 뒤 항CD47 단일클론항체나 IgG 동형 대조군에 노출시켰습니다. 항CD47 항체는 CCRF-CEM 세포의 포식 방지 신호와 결합해 대식세포 매개 대식작용을 촉진합니다. 항CD47을 사용한 경우, 타깃 세포가 골수 유래 대식세포에 탐식되면서 형광 신호가 증가하고 농도에 따른 효과가 발생했습니다. 동형 대조군 IgG를 사용한 경우 어떤 농도로 테스트하든 탐식에 대해 어떠한 영향도 나타나지 않았습니다.
자주 묻는 질문
세포 대식작용 FAQ
여러 대식세포주의 대식작용 능력을 비교하려면 안정적이고 재현성 높은 배양 조건과 주기적인 대식작용 모니터링이 필요합니다. 먼저 pH 민감성 염료로 처리한 미끼나 타깃 세포를 사용해 대식작용을 직접 분석하고, 일정한 간격으로 형광을 나타내는 파고솜의 수를 비교하는 방법을 권장합니다. 자주 모니터링과 이미징이 필요한 분석의 경우 주기적으로 배양 시스템의 교란 없이 이미징이 가능한 실시간 세포분석 플랫폼을 사용하는 것이 좋습니다.
대식세포의 대식작용 분석에 대해 자세히 알아보세요*** [생물입자 대식작용 페이지 링크]
사멸세포 제거는 살아 있는 세포나 세포 파편의 대식작용이 아닌 사멸 세포나 세포자멸 세포의 대식작용을 말합니다. 따라서 대식작용 분석으로도 호중구나 다른 종류의 식세포에서 발생하는 사멸세포 제거 작용을 검출할 수 있습니다.
살아 있는 미생물을 사용한 모든 분석법이 그렇듯, 모든 영향 요인을 통제하는 것은 불가능합니다. 하지만 배양기 내 실시간 세포분석 기술을 사용해 대식작용 분석을 표준화하면 큰 가변성의 원인, 즉 플레이트를 배양기에서 꺼내 이미징하는 데 소요되는 시간을 제거할 수 있습니다. 실시간 세포분석은 수작업 없이 대식세포의 대식작용을 주기적, 포괄적으로 분석할 수 있게 도와줍니다.
일반적으로 대식작용의 속도는 탐식 대상의 크기 및 형태와 모두 관련이 있습니다. 하지만 자극을 받은 식세포는 이동 경로에 있는 모든 대상을 탐식하려고 시도합니다. 타깃 세포가 비정상적으로 크거나 독특한 형태를 가지고 있지 않다면 대식작용 분석용으로 타깃 세포를 선택할 때 세포 크기나 형태의 제약은 사실상 없습니다.
시각적 관찰만을 바탕으로 설계된 대식작용 분석법은 리소좀이 부족한 대식세포의 대식작용을 연구할 때 적합합니다. 그러나 대부분의 다른 대식작용 분석법은 파고솜이 엔도솜 구획과 융합할 때 발생하는 pH 변화와 이로 인한 색 변화를 이용하므로 리소좀이 부족한 대식세포로는 유의미한 데이터를 도출하지 못할 수 있습니다. 이 경우, 실험을 통해 pH에 민감한 대식세포 대식작용 지표의 값을 결정해야 합니다.
주문 정보
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제품 | Qty. | Cat. No. |
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Incucyte® pHrodo® Red 대식작용 세포 라벨링 키트 | 1 키트 | 4649 |
