그림 1A. T세포 활성화와 관련된 세포 매개변수 변화 추적 - 활성화된 T세포의 세포 확대 및 형태 변화를 바탕으로 하위 군집을 분류했습니다.  PBMC는 항CD3 및 IL-2로 처리하거나 매개체만 첨가해 대조군을 만들었고, Incucyte^® 실시간 세포분석 시스템으로 장시간에 걸쳐 모니터링했습니다.  (A-D) 활성화로 인해 시간에 따른 평균 세포 면적 및 편심률 증가가 유도됐습니다(모든 세포).  편심률 변화는 면적 증가보다 먼저 발생했습니다.  세포별 면적 분포(E)와 밀도 그래프(F-H)는 활성화 후 시간에 따른 이질성 증가를 보여주며, 편심률이 높은 대형 세포의 군집을 나타냅니다. 값은 웰 12개의 평균 ±SEM을 나타냅니다.

그림 1B. 활성화된 T세포의 하위 군집 분석: CD71 상향조절 - (A-C) 세포별 분석 밀도 그래프를 보면 CD71 (FabFluor-488로 라벨링) 형광이 시간과 세포 면적에 따라 증가하는 것을 알 수 있습니다.  (D) CD71 양성 세포에서는 활성화 후 동적인 비율 변화가 나타났지만, CD4에 양성인 세포는 그렇지 않았습니다. (E) 하위 군집 분석 결과 소형 세포(110 mm² 미만)보다 대형 세포(100mm² 초과)의 CD71 발현 상향조절이 우선적으로 발생했습니다. 분석 데이터는 활성화로 인한 시간에 따른 CD71 발현 증가를 보여주며, 활성화 4일 후 대형 세포의 90% 이상이 CD71을 발현하는 등 세포 크기와 CD71 사이에 강력한 연관관계가 있음을 시사합니다.

그림 2a. Incucyte^® 실시간 세포분석 시스템의 세포 식별 및 분류를 통한 면역표현형 분석 검증 - 3명의 공여자로부터 채취하여 갓 분리한 PBMC에 대해 6개의 CD 표지자와 IgG 대조군을 특성분석했습니다. 분석은 유세포분석이나 FabFluor-488로 라벨링한 항체를 사용한 실시간 세포 면역세포화학법으로 수행했습니다.  공여자 3명의 평균 값(A) 또는 각 공여자의 값(B)을 고려했을 때 두 방법 사이에는 강력한 상관관계가 관찰되었습니다. 

그림 2b. Incucyte^® 실시간 세포분석 시스템의 세포별 분석 기능을 사용한 다양한 세포의 HER2 발현 표현형 분석 - FabFluor-488로 라벨링한 항체를 사용해 A549, SKOV-3, SkBr3 세포의 HER2 발현을 특성분석했습니다. 형광 이미지(상단)와 정량화(하단) 결과를 보면 A549 세포에서는 HER2 발현이 없었고, SKOV-3 세포에서는 비균질한 발현이 나타났으며, SkBr3 세포의 경우 균일하고 강한 발현이 관찰되었음을 알 수 있습니다. 동형 대조군 반응은 음성 군집을 나타냅니다.

그림 3a. 약리학적 연구에 적합한 풍부한 세포 주기 단계 데이터 생성 - Incucyte Cell Cycle Red/Green 렌티바이러스 시약을 발현하는 HT1080 섬유육종 세포를 시스플라틴 또는 플루러유러실(5FU)로 처리한 후 세포 주기 단계의 분포를 정량화했습니다. 세포 이미지(A)를 통해 24시간 후 반응을 확인할 수 있습니다(외곽선은 Incucyte 세포별 분석 소프트웨어로 식별한 개별 세포를 나타냄). 시스플라틴으로 처리하자 알려진 유사분열 억제 작용기전과 같이 농도와 시간에 따라 G1 단계인 세포(녹색 형광)의 비율은 감소했고(B), S/G2/M 단계인 세포(적색 형광)의 비율은 증가했습니다(C). 5FU 처리 후에는 5FU가 DNA 합성에 미치는 알려진 효과와 같이 G1 단계의 세포 비율이 증가했고(E), S/G2/M 단계인 세포 비율은 감소했습니다(F). 농도반응곡선(D&G)은 24시간 후 검출 가능한 모든 세포 주기 단계에 대한 화합물의 효과를 보여줍니다.

그림 3b. 세포 하위군집의 세포 건강 추적: 캄프토테신(CPT, 세포독성) 또는 사이클로헥시미드(CHX, 세포증식억제) 처리 후 HT1080 섬유육종의 시간에 따른 세포자멸사 과정 - Incucyte^® NucLight Red(핵 생존성 표지자)와 비교란성 Incucyte^® 카스파제 3/7 Green 시약(세포자멸사 지시염료)을 함께 사용해 Multiplex 방식으로 세포 건강을 측정했습니다. 세포 이미지는 24시간 후 반응과 관련 분류 마스킹을 보여줍니다(A&E). 세포 하위 군집은 Incucyte 세포별 분석 소프트웨어 툴을 사용해 적색 및 녹색 형광을 바탕으로 분류했습니다(B & F). CPT로 처리한 후에는 생존 세포의 소실로 인한 적색 군집의 감소, 초기 세포자멸사로 인한 적색 및 녹색 형광의 증가, 후기 세포자멸사로 인한 녹색 형광의 증가를 확인할 수 있습니다(C). CHX 처리 후에는 세포자멸사가 없었습니다(G). 초기 세포자멸사 군집의 시간에 따른 농도 반응 또한 볼 수 있습니다(D & H, 전체 세포 중 적색 및 녹색 형광을 나타내는 세포의 비율). 값은 웰 3개의 평균 ±SEM을 나타냅니다.